论文摘要
目的：构建特异性切割HER-2 mRNA的两个核酶质粒Rz1和Rz2，观察它们对人乳腺癌细胞中HER-2原癌基因的表达和对癌细胞生长的影响，探讨抗HER-2核酶对乳腺癌进行基因治疗的机制，从而在我所构建用小分子RNA技术进行肿瘤基因治疗研究的平台。方法：合成了两个抗HER-2核酶Rz1和Rz2的DNA序列，将其定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1-。将构建好的Rz-pcDNA3.1-质粒转染至人乳腺癌细胞MCF-7，在mRNA水平通过半定量RT-PCR观察HER-2及其它重要癌症相关基因的变化；通过荧光激发细胞分类术（FACS）观察HER-2蛋白表达水平的变化；最后将稳定转染Rz1的MCF-7细胞系对裸鼠进行皮下注射，以未处理的MCF-7细胞作为对照，注射一周后开始观察肿瘤的体积大小和生长速度。结果：Rz2没有明显的作用；瞬时转染实验中，转染Rz1 48小时后MCF-7细胞HER-2的表达在mRNA和蛋白水平都有下降；这个结果在稳定转染Rz1的细胞系中得到了进一步的证实；在其它癌症相关重要基因的半定量PCR实验中发现，HER-2表达下降的同时，k-ras等基因表达下降，而p53等基因表达反而升高；在裸鼠成瘤实验中发现，与对照组相比，注射稳定转染Rz1的MCF-7细胞系的裸鼠，其出现肿瘤的时间较长，而且肿瘤生长较慢。结论：抗HER2的核酶能降低MCF-7中HER2的表达；随着HER-2表达的下降，k-ras的表达下降更多，而p53的表达增加；抗HER-2的核酶能抑制MCF-7在裸鼠成瘤。