论文摘要
第一部分 目的 建立C57BL/6J小鼠肝癌动物模型，为深入开展肝细胞癌的实验研究打下基础。 方法 取90只C57BL/6J小鼠，联合采用二甲基亚硝胺（DEN）/四氯化碳（CCl4）/乙醇（ethanol）诱导20周（w），观察其肝癌发生的情况。另取10只作为正常对照组。 结果 90只C57BL/6J小鼠共死亡8只，存活的82只小鼠中有71只发生肝癌（78.89％）。11只有不同程度的药物中毒性肝炎、肝硬化（12.22％）。对照组小鼠，其肝脏均未发现明显异常。实验组小鼠的肝癌组织学类型以中、高分化为主，部分伴有肝硬化。 结论 采用DEN/ CCl4/乙醇联合能诱导出C57BL/6J甲胎蛋白分泌型小鼠肝癌，模型稳定，诱导时间相对较短，癌变率高，经历了肝炎、肝硬化阶段，与人肝癌的发生发展过程相似，是较理想的研究肝癌的实验动物模型。 第二部分 目的 构建表达小鼠甲胎蛋白（murine alpha fetoprotein，mAFP）基因的重组腺病毒载体（pAdBM5-mAFP），并并获得高滴度的重组腺病毒。同时构建pcDNA3.1（+）-mAFP真核表达载体。 方法 从Hepa1-6小鼠肝癌细胞中提取总RNA，设计特异性引物，通过RT-PCR法扩增mAFP基因编码区全长序列，测序确认后，分别插入到pAdBM5穿梭载体和pcDNA3.1（+）真核表达载体中（供后续脂质体将pcDNA3.1（+）-mAFP转染EL4用）。双酶切鉴定重组腺病毒载体。线性化重组腺病毒载体与病毒骨架DNA质粒，用磷酸钙共沉淀法共转染HEK293A细胞，通过同源重组使腺病毒表达mAFP基因，并在HEK293A细胞中大量扩增
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