热休克蛋白65-HER2多表位融合蛋白的构建及其生物学功能研究

热休克蛋白65-HER2多表位融合蛋白的构建及其生物学功能研究

论文摘要

乳腺癌是严重危害女性健康的恶性肿瘤。研究发现: HER2蛋白(HER2)的表达与乳腺癌的发生、转移和预后密切相关。正常情况下,HER2在乳腺上皮细胞和其他正常细胞有低水平表达。约有25-30%的乳腺癌患者的肿瘤细胞高水平表达HER2,此外,高表达HER2的乳腺癌患者易产生耐药性并多有不良的预后。因此,HER2可能成为乳腺癌免疫治疗的靶点。结核分支杆菌热休克蛋白65(HSP65)具有分子伴侣及分子佐剂的作用。在抗肿瘤的免疫应答过程中,HSP65可激活机体的非特异性免疫系统,并可引导与其形成复合物或与之融合的抗原肽在树突状细胞内经MHCI类途径加工递呈,从而激活抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞( CTLs )。我们将HSP65与HER2的表位肽基因相连接,并在大肠杆菌中成功地表达了热休克蛋白65-HER2多表位融合蛋白(HSP65-HER2)。获得纯化的HSP65-HER2后,我们研究了HSP65-HER2的生物学功能。人体外实验表明:经HSP65-HER2诱导的T淋巴细胞可通过特异性及非特异性的免疫机制抑制HER2阳性肿瘤细胞的生长。小鼠体内实验表明:HSP65-HER2能够诱导对HER2阳性肿瘤细胞的特异性杀伤。因此,HSP65-HER2可能成为一种对HER2阳性乳腺癌有预防或治疗价值的新的生物制剂。

论文目录

  • 英文缩写词表
  • 前言
  • 第一章:文献回顾
  • 一、HER 家族概述
  • 二、HER2 的研究现状
  • (一) HER2的基因结构与蛋白质组成
  • (二) HER2的转录调控基因
  • (三) 与HER2基因转录调控有关的转录因子
  • (四) HER2的信号转导
  • (五) HER2/ neu 与乳腺癌及其他肿瘤的发生、发展
  • (六) HER2与乳腺癌预后
  • (七) 靶向HER2的药物研究进展
  • 三、热休克蛋白的研究现状
  • (一) HSP的分类
  • (二) HSP的基因特点
  • (三) HSP的转录
  • (四) HSP的翻译
  • (五) HSP的生物学功能
  • 第二章:材料和方法
  • 一、实验材料
  • (一) 限制性内切酶及有关试剂
  • (二) 质粒与菌株
  • (三) 细胞株及有关试剂和实验动物
  • (四) 引物的合成及肽的合成
  • (五) 培养基
  • (六) 抗体,荧光抗体及细胞染色相关试剂
  • (七) 流式细胞仪
  • 二、主要方法
  • (一) 采用 PCR 法合成特异性基因/DNA 片段
  • (二) 构建pMD-18T-HER2 质粒
  • (三) 目的质粒的构建
  • (四) 细胞转染及鉴定
  • (五) HSP65-HER2 融合蛋白的表达、鉴定、纯化
  • (六) 小鼠体外细胞毒T 淋巴细胞活性测定
  • (七) 人外周血单个核细胞(PBMC)的分离
  • (八) HSP65-HER2 及HSP65 融合蛋白对人PBMC 的影响
  • (九) 人树突状细胞(DC)的诱导
  • +T 细胞的诱生'>(十) HSP65-HER2 对 HER2 特异性CD8+T 细胞的诱生
  • (十一) 用 DIMER 染色法检测表位特异性的 CTL
  • (十二) 人体外抑瘤实验
  • (十三) 细胞内染色法检测 IFN-γ的分泌
  • (十四) 细胞凋亡的检测
  • (十五) FATAL法进行杀伤实验
  • 第三章:实验结果
  • 一、HSP65-HER2 重组蛋白的构建、表达和纯化
  • (一) HER2 多表位融合蛋白基因片段的合成
  • (二) pET28a-HSP65-HER2 重组质粒的构建
  • (三) HSP65-HER2 重组蛋白的获得
  • 二、HSP65-HER2生物学功能的研究
  • (一) HSP65-HER2 重组蛋白的体外抑瘤效应
  • (二) HSP65-HER2重组蛋白的抑瘤机理
  • (三) HSP65-HER2 作用于小鼠 HER2 阳性肿瘤细胞的初步研究
  • 图和照片
  • 第四章:讨论
  • 一:HSP65-HER2融合蛋白中HER2表位肽的选取
  • (一) HER2 CTL表位肽的选取
  • (二) HER2 TH表位肽的选取
  • (三) HER2 B 细胞表位肽的选取
  • 二:FATAL 法检测CTL 或NK 细胞的杀伤活性
  • 三:HSP65-HER2 诱导杀伤HER2 高表达肿瘤细胞机制的研究
  • (一) HSP65-HER2 能够激活机体的特异性免疫系统
  • (二) HSP65-HER2 能够激活机体的非特异性免疫系统
  • 结论
  • 参考文献
  • 攻读博士期间发表论文情况
  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 致谢
  • 相关论文文献

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    • [7].乳腺癌Her2过表达与其他因素对预后的影响[J]. 医药论坛杂志 2017(05)
    • [8].曲妥珠单抗在HER2阳性乳腺癌治疗中的心脏毒性及防治[J]. 癌症进展 2016(01)
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    • [10].HER2阳性胃癌的治疗进展[J]. 岭南现代临床外科 2014(06)
    • [11].HER2阳性胃癌的临床研究进展[J]. 人人健康 2020(02)
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    • [18].HER2过表达对胃癌预后的影响及其临床应用[J]. 现代肿瘤医学 2015(04)
    • [19].HER2阳性乳腺癌靶向治疗的研究进展[J]. 中国城乡企业卫生 2020(11)
    • [20].HER2蛋白在卵巢上皮性癌中的表达状态及其临床病理意义[J]. 中国医药导报 2013(02)
    • [21].HER2基因与乳腺癌关系研究[J]. 工企医刊 2013(04)
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    • [29].Her2过表达与乳腺癌治疗的相关性研究进展[J]. 现代肿瘤医学 2010(01)
    • [30].HER2在结直肠癌中的表达及意义[J]. 中国老年学杂志 2010(10)

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