论文摘要
RNA干扰（RNAi, RNA interference）是dsRNA介导的特异性基因表达沉默现象,是生物界一种古老而且进化上高度保守的基因表达调节机制。RNAi在生物体中普遍存在,原虫、线虫、真菌、昆虫以及哺乳类动物中都已发现RNAi现象。本研究将IE-1基因+18+446区以反向串联方式连接,构建在细胞内能利用IE-1基因启动子转录形成发夹状dsRNA的RNAi表达载体pSK-IE,和转基因RNAi载体pigA3-IE-Neo。将pSK-IE转染细胞,注射蚕蛹均表现出对BmNPV抑制作用。表明IE-1启动子可以用作构建RNAi DNA载体的启动子,转染效率的高低直接影响到RNAi的检测。用pigA3-IE-Neo转染细胞,G418筛选4个月,获得了转pigA3-IE-Neo细胞,阳性率可达到80%。感染BmNPV后,转基因细胞相比正常细胞表现出对BmNPV更强的抑制作用。另外,克隆了BmNPV的alk-exo基因,并构建了基于alk-exo基因的系统进化树;用原核表达系统和昆虫表达系统成功实现了SARS-CoV S与M基因的融合表达。
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