周波朱利平顾蕾蕾（江苏省药物研究所/江苏省药物安全性评价中心210009）
【摘要】目的研究注射用伏立康唑对小鼠的急性毒性作用，为临床安全用药提供参考。方法将注射用伏立康唑配制成适当浓度，观察小鼠静脉注射的急性毒性。结果注射用伏立康唑小鼠急性毒性试验设定剂量分别为：274mg/kg、247mg/kg、222mg/kg、200mg/kg、180mg/kg、162mg/kg和对照组。274mg/kg组死亡率为90%；247mg/kg组死亡率为70%；222mg/kg组死亡率为40%；200mg/kg组死亡率为30%；180mg/kg组死亡率为20%。162mg/kg和对照组无动物死亡。结论注射用伏立康唑小鼠静脉给药半数致死量（LD50）为223.07mg/kg，95%可信区间为208.18－239.03。
【关键词】注射用伏立康唑急性毒性动物实验
【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）34-0054-01
注射用伏立康唑是一种广谱的三唑类抗真菌药，其作用机制是抑制真菌中由细胞色素P450介导的14α-甾醇去甲基化，从而抑制麦角甾醇的生物合成。本品对念珠菌属具有抗菌作用，对所有检测的曲菌属真菌有杀菌作用。此外，伏立康唑在体外对其他致病性真菌也有杀菌作用，包括对现有抗真菌药敏感性较低的菌属。临床上主要用于治疗免疫缺陷患者中进行性的、可能威胁生命的感染[1]。本试验在GLP条件下，按照相关指导原则要求，对注射用伏立康唑的急性毒性进行研究。
1材料与方法
1.1药物与试剂
注射用伏立康唑（voriconazole,50mg/支），批号20100201，由江苏省药物研究所提供；本品为白色冻干块状物，拟定临床人用剂量为12mg/kg/d；5%葡萄糖注射液，由南京小营药业集团有限公司提供，批号2009021801。
1.2动物
SPF级ICR小鼠80只，雌雄各半，5-6周龄，体重18-22g；生产许可证号：SCXK(军)2007-004，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供。购回后检疫3天后用于试验，检疫内容包括体重、天然孔、食欲、排泄物以及毛发观察等。
1.3方法
1.3.1预试验
按照相关指导原则[2]，首先进行预试验，给药前先按需要用5%葡萄糖注射液将注射用伏立康唑溶解，配制成不同浓度的溶液，称量小鼠的体重，根据体重给药，给药容积为0.4ml/20g。设置3个剂量组，为300mg/kg、250mg/kg和150mg/kg；每个剂量组3只小鼠。给药后各个剂量组均出现呼吸急促、翻正反射消失、身体僵直、角弓反张等中枢神经系统中毒症状，300mg/kg剂量组3只动物给药后4小时内均死亡；250mg/kg剂量组有2只动物给药后4小时内死亡；150mg/kg剂量组均无动物死亡。存活动物在给药24小时后逐渐恢复正常。
1.3.2正式试验
1.3.3.1试验剂量和分组
根据预试验结果，参考相关指导原则和文献[2,3]，本次注射用伏立康唑小鼠急性毒性试验剂量设定为：274mg/kg、247mg/kg、222mg/kg、200mg/kg、180mg/kg、162mg/kg和对照组。距间比为0.9。给药浓度分别为13.7mg/ml、12.4mg/ml、11.1mg/ml、10.0mg/ml和9.0mg/ml和8.1mg/ml。每组10只，雌雄各半，给药容积为0.4ml/20g。同时设对照组，给予同等体积的5%葡萄糖注射液（表1）。
根据动物体重按区组随机化分组法进行分组，雌、雄动物分开分组，具体过程如下：在分组当天对所有动物进行称重后按体重分区，再将每个区组内的动物随机分配到不同组别中。
表1注射用伏立康唑小鼠急性毒性试验剂量设计及分组表
*表示对照组给予同等体积的5%葡萄糖注射液。
1.3.2临床观察及LD50计算
给药后连续观察4小时，若各组动物均未出现明显异常反应，则结束观察，若有动物出现明显异常毒性反应症状，则注意密切观察和记录动物的临床反应症状。此外在整个试验期间每天上午进行1次临床症状和死亡情况观察，具体动物临床症状观察的内容包括：动物死亡或濒死、精神状态、行为活动、皮肤、被毛、眼、耳、鼻、口腔、外生殖器、肛门、四肢、粪便性状以及呼吸等。
根据所观察到的各种毒性反应出现的时间、严重程度、持续时间以及大体解剖中肉眼可见的病变和组织病理学检查的结果分析判断出现的各种反应可能涉及的组织、器官或系统，初步判断可能的毒性靶器官。采用Bliss法计算LD50和95%可信限。
2结果
小鼠静脉注射后，各个剂量组均出现呼吸急促、翻正反射消失、身体僵直、痉挛、震颤、角弓反张等中枢神经系统中毒症状，给药后次日有部分小鼠出现后肢瘫痪症状，随着剂量的减小症状减轻。274mg/kg组有9只动物死亡，死亡率为90%；247mg/kg组有7只动物死亡，死亡率为70%；222mg/kg组有4只动物死亡，死亡率为40%；200mg/kg组有3只动物死亡，死亡率为30%；180mg/kg组有3只动物死亡，死亡率为20%。大部分小鼠在给药后24h以内死亡，对急性死亡鼠进行解剖，肉眼观察未见各主要脏器明显异常变化。实验结束时各组存活小鼠经解剖，未见各主要脏器明显异常变化。用Bliss法计算，注射用伏立康唑小鼠静脉给药半数致死量（LD50）为223.07mg/kg，95%可信区间为208.18－239.03。具体各组动物死亡情况见表2。
表2注射用伏立康唑小鼠急性毒性试验结果
3讨论
本次试验的受试药物注射用伏立康唑的急性毒性结果为人临床剂量的18倍左右（人体重按照70kg计算）。表明注射用伏立康唑有较大的毒性作用，主要表现为中枢神经系统的毒性。临床上主要用于治疗免疫缺陷患者中进行性的、可能威胁生命的感染。所以在长期毒性试验以及临床试验中应注意观察伏立康唑对中枢神经系统方面的影响。本次试验严格按照毒理学的标准进行测定，结果真实可靠，我们可以得出注射用伏立康唑后小鼠的半数致死剂量。通过此次研究，为今后进行注射用伏立康唑的长期毒性实验、遗传实验等试验设计提供剂量选择依据和有关毒性信息，进一步丰富了注射用伏立康唑的毒理学资料，对于研究和评价其毒性具有重要意义。
参考文献
[1]RoffeySJ,ColeS,CombyP,etal.Thedispositionofvoriconazoleinmouse,rat,rabbit,guineapig,dog,andhuman.DrugMetabDispos2003;31:731-41.
[2]国家食品药品监督管理局,化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则[Z].2005-03.
[3]袁伯俊,廖明阳,李波.药物毒理学实验方法与技术[M].北京:化学工业出版社.2007,250-261.