苦瓜中降血糖活性成分的高通量筛选研究

论文摘要

苦瓜（Momordica charantia linn，MC）既是我国主要的蔬菜，也是典型的药食同源植物。已有的药理试验研究表明苦瓜汁及其制剂、苦瓜水提物和醇提物等都具有显著的降血糖作用。苦瓜降血糖的作用机理也是近年来苦瓜药理研究的热点之一。 过氧化物酶体增殖因子活化受体(（Peroxisome proliferators activater receptor，PPAR）是核受体家族的新成员，在脂肪和糖代谢平衡中起重要作用。本论文中应用基于反式激活原理的细胞水平PPAR激动剂高通量筛选（High Throughput Screening，HTS）模型，从苦瓜中筛选活性部位与活性成分，同时对其进行化学研究。 1．苦瓜中PPAR激动剂的高通量筛选研究 首次运用PPAR三种亚型为靶点的高通量筛选模型，对苦瓜的提取物和提取物的分离纯化产物进行活性筛选。结果表明： （1）5种不同的苦瓜提取物组分（MC1、MC2、MC3、MC4、MC5）对PPARα均无激活作用。MC3对PPARδ和PPARγ具有较强的激活效果，其激活倍数分别达1.995、1.689。 （2）多糖MC3-2和MC3-4样品对PPARγ受体有激活作用。其中，MC3-2对PPARγ受体的激活作用更强。MC3-2的Sephadex G-100分离产物中，多糖MC3-2-1和MC3-2-2样品都能激活PPARγ受体，其中MC3-2-2对PPARγ受体的激活作用更强些。 （3）MC2-3组分能较强地激活PPARα、γ、δ受体，其激活倍数分别为1.7607、3.7730、1.7846。MC2-2组分对PPARδ受体的激活作用较弱。其中MC2-3组分的PPARδ活性明显高于对照药物2-Bro-（5uM）。 （4）苦瓜苷（Charantin）能较强地激活PPARα、δ、γ受体，其激活倍数分别为1.7218、1.7797、1.6818，是PPAR的三效激动剂。 MC3、MC2-3和Charantin将成为苦瓜降脂、降糖、减肥作用的主要活性因子。 2．苦瓜多糖的分离、纯化与化学研究 采用DEAE-52纤维素柱色谱和Sephadex G-100凝胶柱色谱对MC3进行分离纯化研究。MC3经DE-52分离得到5组分，其中MC3-2和MC3-4是活性成分。MC3-2再经凝胶过滤色谱分离得到多糖MC3-2-1和MC3-2-2，其平均相对分子质量经HPLC测定，分别为8.4×104和1.7×104；经TFA水解后得到的糖

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1 过氧化物酶增殖体激活受体（PPAR）靶点
• 2 PPAR与代谢综合征的关系
• 2.1 PPAR结构
• 2.2 PPARαγ的分子生物学及其作用
• 2.3 PPARγ的分子生物学及其作用
• 2.4 PPARβ/δ的分子生物学及其作用
• 2.5 PPAR配体及其筛选方法研究
• 3 苦瓜的药理功能研究进展
• 3.1 苦瓜的化学成分研究
• 3.2 苦瓜的降血糖作用研究
• 3.3 苦瓜降血糖作用机理的研究
• 3.4 苦瓜降血糖活性成分的研究
• 4 研究目的和意义
• 5 主要研究内容
• 第二章 苦瓜活性部位的高通量筛选
• 1 材料与方法
• 2 结果与讨论
• 2.1 加药量的确定
• 2.2 苦瓜提取物对 PPAR的激活效果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 苦瓜多糖的分离、纯化与活性研究
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 2.1 苦瓜粗多糖MC-3的提取
• 2.2 粗多糖MC3的DE-52柱层析
• 2.3 5种组分对PPAR激动效果研究
• 2.4 MC3-2的分离纯化
• 2.5 MC3-2-1和MC3-2-2的活性研究
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 苦瓜多糖的结构分析
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 2.1 分子量测定
• 2.2 MC3和MC3-2的氨基酸组成分析
• 2.3 IR图谱分析
• 2.4 单糖组成分析
• 2.5 高碘酸氧化和 Smith降解
• 3 讨论
• 4 小结
• 第五章 苦瓜多糖测定方法和提取工艺研究
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 2.1 单糖的组成分析
• 2.2 回归方程
• 2.3 苦瓜多糖测定方法的稳定性
• 2.4 加样回收率试验
• 2.5 精密度试验
• 2.6 苦瓜多糖提取工艺参数的正交试验结果与分析
• 2.7 苦瓜多糖提取率和含量分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 第六章 苦瓜中胡萝卜苷的HPTLC分析和提取工艺研究
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 2.1 薄层层析条件的确立
• 2.2 苦瓜甾苷薄层及光谱扫描
• 2.3 稳定性试验
• 2.4 标准曲线的考察
• 2.5 回收率试验
• 2.6 精密度试验
• 2.7 提取条件对提取效果的影响
• 2.8 最佳提取工艺的确定
• 3 讨论
• 4 小结
• 第七章 胡萝卜苷的富集与活性研究
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 2.1 D101树脂对苦瓜醇提物分离
• 2.2 树脂吸附前后HPTLC比较
• 2.3 MC2-3中胡萝卜苷含量HPTLC测定
• 2.4 MC2-2和MC2-3活性筛选
• 2.5 MC2-3硅胶层析
• 2.6 化合物 I和化合物 II的活性研究
• 2.7 化合物 I的确证
• 3 讨论与小结
• 全文结论
• 参考文献
• 附录
• 缩略词表
• 致谢
• 作者简介
• 在读期间论文发表与成果