Survivin反义寡核苷酸对裸鼠人血管瘤种植瘤血管生成的影响

论文摘要

血管瘤由大量新生毛细血管和增殖的内皮细胞组成，是“血管形成依赖”性疾病。血管形成的核心是内皮细胞的增殖和凋亡。如何能通过干预血管形成中的关键基因，以控制内皮细胞的增殖和凋亡，是促进或抑制血管形成的关键。survivin是新近发现的，迄今为止最强的凋亡抑制因子，有研究表明及本课题组前期发现survivin、VEGF和caspase-3在血管瘤的增生期和消退期表达有差异，并相关。本研究采用survivin及其基因沉默技术，体外培养血管瘤内皮细胞种植裸鼠皮下建立裸鼠人血管瘤动物模型，并用脂质体包裹Survivin ASODN干预，探讨survivin对血管瘤血管形成的影响，从而阐明survivin及其基因封闭技术对血管瘤血管形成的作用机制，为寻找促进和抑制血管形成的新靶点提供理论和实验依据。第一部分婴幼儿增生期血管瘤内皮细胞的培养和鉴及生状况的观察目的：婴幼儿增生期血管瘤内皮细胞的体外分离培养、纯化及鉴定。方法：采用组织化法对12例新鲜婴幼儿血管瘤行细胞培养，细胞培养成功后，在相差显微镜刮除非内皮细胞。待内皮细胞铺满瓶底，进行传代，同时运用反复贴壁法及酶消化法进行数次纯化，取4代内皮细胞进行免疫组化法对内皮细胞进行鉴定并检测内皮细胞纯度。对所培养的细胞进行计数并绘制细胞生长曲线图。结果：12例标本均成功培养出血管瘤内皮细胞，培养的内皮细胞形态为较规则的圆形、椭圆形或多角形，核居中，部分可见核分裂及双核，细胞境界清楚，细胞融合后内皮细胞特有“铺路石”特征。并通过免疫组化CD31、CD34和Ⅷ因子相关抗原鉴定证实为内皮细胞。检测纯度为CD34（+）数为67.88%±4.25%，所培养的细胞具有“管腔形成”现象。结论：该实验可以满足本研究相关需要。目的：研究Survivin ASODN对人增生期血管瘤裸鼠种植瘤生长的影响。方法：将体外培养的细胞浓度调整为1.0×108个/ml，取0.2mL注入裸鼠皮下，建立人增生期血管瘤裸鼠种植瘤动物模型。瘤体直径大于1㎝时随机分为3组，以脂质体包裹的survivin及其反义核酸survivin局部注射于瘤体，观察干预后的瘤体大小、重量、微血管密度变化；用免疫组织化学法检测干预后瘤体中survivin、VEGF、caspase-3的蛋白表达情况。结果：成功建立人增生期血管瘤裸鼠种植瘤动物模型。ASODN/lip组的肿瘤体积在干预期内下降，而NODN/lip组和空白对照组体积增加；瘤重较其它两组减轻，抑瘤率为56.57%；免疫组化染色后可见ASODN/lip组Suvrivin、VEGF蛋白的表达明显下降，而Caspase-3的表达上调呈强阳性；并导致反义组MVD较其它两组明显减少。结论：Survivin ASODS体内转染可有效抑制体内人血管瘤种植瘤的生长速度，抑制瘤体血管形成，加速瘤体向消退期转变。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 婴幼儿增生期血管瘤内皮细胞的体外培养和鉴定及生长状况的观察
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第二部分 Survivin 反义寡核苷酸对裸鼠人血管瘤种植瘤血管生成的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 全文总结
• 参考文献
• 致谢
• 附录
• 附录 A 缩略词表
• 附录 B 综述血管瘤模型的研究现状
• 参考文献