谢益1杜刚2沙轲2秦小勇3张波1通讯作者
（1南宁市第二人民医院；广西南宁530031；2广西医科大学第一附属医院；广西南宁530021；3柳州市人民医院；广西柳州545006）
摘要目的：通过神经松解术治疗糖尿病足溃疡大鼠，观察神经松解术对糖尿病足溃疡的治疗效果。探讨神经松解术治疗糖尿病足溃疡机制。方法：随机将20只糖尿病大鼠分为实验组（10只）和对照组（10只）。通过磁铁压迫方法建立糖尿病足溃疡模型。建模成功后4周，对照组大鼠单纯换药，实验组大鼠松解腓总神经、腓深神经及胫后神经。记录两组实验开始、1周、2周、3周、4周创面愈合情况。并于4周后取创面组织免疫组织化学染色检测VEGF水平。结果：术后1周、2周的差异无明显统计学意义（P＞0.05），术后3周、4周两组有明显统计学差异（P<0.05）.实验4周实验组、对照组创面CD34水平分别为21.6±2.84、14.9±2.02，差异有明显统计学意义（P<0.05）。VEGF实验组、对照组染色结果分别为81.67±10.41%、36.67±11.55%，两组创面VEGF水平存在明显差异。
结论：神经松解术对糖尿病足溃疡治疗有明显效果。神经松解术可能通过重建创面血供影响其愈合。
糖尿病足溃疡(diabeticfootulcers,DFUs)是糖尿病严重并发症之一，其致残、致死率高。糖尿病足溃疡是指下肢远端神经感觉异常和下肢远端外周血管病变相关足部感染、溃疡和深层组织破坏，从而导致慢性溃疡。我们前期在临床中采用神经松解术治疗糖尿病足取了了良好的疗效，本实验主要通过动物研究探讨神经松解术治疗糖尿病足溃疡的可能机制。
1.材料及方法
1.1糖尿病足溃疡模型建立：
1)SD大鼠置于SPF级环境中喂养，用2%的戊巴比妥钠按30mg/kg腹腔注射，麻醉起效后，无菌条件下，在大鼠左后足常规备皮、消毒。于左后足作长4cm切口分离至深筋膜，植入条形磁铁（灭菌）一枚，缝合伤口，伤口处喷洒青霉素液。
2）大鼠伤口痊愈后，禁食12时后，腹腔内注射60mg/kg/d1%STZ溶液，用血糖试纸测尾静脉血糖，连续三次测得血糖≥16.7mmol/L作为糖尿病成模标准。
3）糖尿病大鼠成模型后，在皮下磁铁对应皮肤外放置一枚磁铁，使两者相互吸引压力在50mmHg[3]。每天三个循环，每次2h,松开30min，至大鼠皮肤出现溃烂、变黑、坏死为造模成功[4]。
4）造模成功后，按数字随机分组法，将20只糖尿病足溃疡大鼠分成实验组（10只）和对照组（10只），实验组松解腓总神经、腓深神经及胫后神经神经外膜黏连卡压组织。而对照组给予创面每天一次单纯换药。观察创面愈合状况。记录实验开始、1周、2周、3周、4周创面面积。
1.2VEGF水平测定
离体大鼠创面创缘0.5cm组织，通过HE染色观察标本镜下大体情况。运用免疫组织化学染色检测VEGF水平。将标本固定、包埋、脱蜡、水化，柠檬酸液高压修复，3%H2O2溶液孵育，加入相应一抗、二抗，加100ul新鲜配制的DAB显色液，苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜下观察染色结果。
1.3实验数据处理
将实验数据导入SPSS17.0软件，实验数据以X±S表示。两组数据采用T检验比较，P<0.05代表两组数据之间存在明显差异。
2.结果
2.1VEGF免疫组织化学染色
随机从两组中分别抽取三个标本进行免疫组织染色，在200X镜下观察被染成棕色或棕黄色细胞所占视野总细胞百分比即为两组染色结果。实验结果显示，实验组81.67±10.41，对照组36.67±11.55，对照组和实验组两者间有明显差异P<0.05。
3.讨论
VEGF是一种较强的生长因子,能够促进血管内皮细胞增殖，诱导血管形成，增加血管通透性。VEGF受体（VEGFR）包括VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3，其中VEGF与VEGF-2结合能够促进血管内皮增殖及血管的形成[12]。VEGF与VEGF-2结合之后，能够激活过PLC--PKC-RafMEK-MAPK信号通路，将信号传递至细胞核内，同时激活DNA的合成，进一步促进内皮细胞的增殖[2]。同时VEGF与VEGFR-2结合通过PI3K/Akt信号通路激活化内皮型一氧化氮合酶(endothelialnitricoxidesynthase，eNOS，从而生成NO，进一步导致血管通透性改变。有研究表明，VEGF能抑制内皮抑素（endostatin，ES)对诱导血管内皮细胞凋亡的作用[3]。
VEGF是糖尿病周围神经病变的形成中的重要因素，目前有学者认为神经轴突可释放出VEGF。有学者实验发现，糖尿病足溃疡创面中VEGF表达减少[2]。同时在实验结果中,我们发现VEGF水平两组存在明显差异,实验组中VEGF水平明显升高。通过实验可以得出，神经松解术组溃疡创面中，血管增生明显，VEGF水平明显增高，血运较对照组好。神经松解术能够促进创面血管生长，重建创面血供。神经松解术是否通过抑制miRNA表达来促进创面VEGF表达，从而促进血管的形成有待进一步研究。神经松解术可为患者提供新的治疗途径。
[1]VegaD.,WestK.,TelladoJ.M.(2003)DiabeticFoot.In:ScheinM.,MarshallJ.C.(eds)SourceControl.Springer,Berlin,Heidelberg.
[2]Volmer-TholeMaren,LobmannRalf.NeuropathyandDiabeticFootSyndrome.[J].Internationaljournalofmolecularsciences,2016,17(6).
[3]王瑛，但齐琴,王庆萍,等.人脐带间充质干细胞治疗大鼠糖尿病神经性足溃疡的疗效及VEGF表达变化［J］．四川大学学报（医学版），2014，45：29-33．
课题资助：南科发（2016）47号：20163339；广西卫生厅自筹基金：Z2015665；lryjj201503。