雌激素、吉非贝齐对载脂蛋白AⅠ基因转录调控作用的研究

论文摘要

目的:观察雌激素和吉非贝齐对载脂蛋白AⅠ（Apolipoprotein A Ⅰ,ApoA Ⅰ）基因转录活性和表达的影响,探讨ApoA Ⅰ基因启动子区域调控元件在基因转录调控中的作用和潜在机制。 方法:在体外培养的HepG2细胞中,分别加入1,10,20,30μ mol/L的雌激素或20,40,50,60μg/ml的吉非贝齐共同孵育24小时,收集细胞提取RNA及核蛋白;在HepG2细胞中加入10μ mol/L雌激素或40μ g/ml吉非贝齐培养1,6,24小时分别提取RNA及核蛋白。RNA采用逆转录-聚合酶链反应方法测定不同剂量及不同时间点的ApoA Ⅰ mRNA表达。以ApoA Ⅰ基因启动子肝特异性增强子的A位点序列为探针,用凝胶电泳迁移率滞后实验（EMSA）,测定加入雌激素刺激的HepG2细胞核蛋白提取物与A位点的结合情况:以ApoA Ⅰ基因启动子-77～-45bp（drug reaction element,DRE）序列为探针,用EMSA实验测定加入吉非贝齐刺激的HepG2细胞核蛋白提取物与DRE位点的结合情况 结果:（1）用不同剂量的雌激素刺激HepG2细胞,ApoA Ⅰ的mRNA表达呈剂量依赖性增加,加入10,20,30μ mol/L雌激素刺激后,ApoA Ⅰ的mRNA表达明显高于1 μ mol/L时,并且随剂量的增加而增高。用10 μ mol/L雌激素刺激HepG2细胞1小时后,ApoA Ⅰ mRNA表达水平未见增加,6小时后ApoA Ⅰ mRNA表达水平开始增加,以24小时后的表达水平最高。（2）EMSA实验结果显示,以ApoA Ⅰ启动子区域肝特异性增强子的A位点作为探针,可与某种核蛋白特异性结合。当雌激素浓度为1 μ mol/L时,A探针结合的蛋白量变化不明显,当雌激素浓度增加到10,20,30μ mol/L时,A探针结合的蛋白量也逐渐增多。此外,A探针结合的核蛋白量随时间的延长而增加。竞争抑制实验显示,加入50倍未标记的A探针后可部分抑制标记A探针与核蛋白的结合,加入100和200倍未标记A探针后可完全抑制标记A探针与核蛋白

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• 参考文献
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