论文摘要
背景和目的转录信号转导子与激活子3 （ signal transducers and activators of transcription 3, STAT3）及其介导的信号转导通路参与调节细胞的增殖,凋亡与分化,并介导细胞的恶性转化,体内外阻断（或抑制）某些肿瘤细胞中STAT3信号通路,可诱导瘤细胞凋亡,并抑制瘤细胞生长和存活。近期发现的干扰素（Interferon, IFN）/维甲酸（retinoid,RA）联合应用诱导细胞凋亡相关的基因GRIM-19（Genes associated with Retinoid-Interferon induced Mortality 19, GRIM-19）,属STAT3特异性抑制蛋白,本研究旨在构建携带GRIM-19基因的腺病毒并探讨Grim-19对结肠癌凋亡及化疗敏感性影响。方法以pcxn2-Grim19重组质粒为模板, PCR扩增Grim19,将Grim19 cDNA克隆于穿梭质粒pAdTrack-CMV , PmeI线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183感受态细胞,获得带有Grim19基因的重组腺病毒质粒Ad-Grim19,并酶切鉴定后,经PacI线性化后转染HEK293包装细胞,观察细胞内绿色荧光蛋白表达情况,并进行3轮扩增,收获腺病毒重组病毒子。将重组腺病毒Ad-Grim19转染sw480细胞并通过流式细胞技术检测其凋亡表现。pcxn2-GRIM19与pcxn2-STAT3质粒在脂质体lipofectamine2000的介导下转染结肠癌细胞sw480,通过蛋白Western Blot分析GRIM19在sw480细胞中的表达情况;利用流式细胞术检测GRIM19对细胞凋亡的影响;GRIM19与顺铂联合应用后分析sw480细胞凋亡表现及bcl-xl蛋白的表达情况。结果经酶切鉴定重组腺病毒Ad-Grim19构建成功,荧光表现表明Ad-Grim19在HEK293包装细胞中表达;重组腺病毒pAd-Grim19转染sw480细胞后使其凋亡率升高。外源性的GRIM19基因转染sw480细胞后,GRIM19蛋白表达增加,GRIM19过表达促进sw480细胞凋亡,GRIM19与STAT3共转染sw480细胞时GRIM19的促凋亡作用减弱;GRIM19可使抗凋亡蛋白bcl-xl表达降低,增强顺铂诱导凋亡的作用。结论成功构建重组腺病毒Ad-Grim19,Grim19在sw480结肠癌细胞系中的过表达可促进其凋亡其增强其对顺铂的化疗敏感性。
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