顺铂、环丙沙星及二者联合对人肝癌BEL-7402细胞抑制作用体外实验研究

论文摘要

目的用临床上常用的抗肿瘤药物顺铂（Cisplatin,DDP）,喹诺酮类抗菌药物环丙沙星（ciprofloxacin,CIP）及二者联合作用于人肝癌BEL-7402细胞,观察其细胞增殖、损伤修复及迁移的变化,并从分子水平研究DDP、CIP对人肝癌BEL-7402细胞侵袭迁移重要基因MMP的影响,探讨DDP、CIP可能的分子机制,从而为临床进一步应用此药物治疗肝癌提供依据。方法体外培养BEL-7402细胞,将细胞分成4组,分别为空白对照组、DDP组、CIP组、DDP联合CIP组。采用对数生长期的细胞进行实验。以四氮唑盐还原法（MTT法）测定生长抑制率,计算半数抑制浓度（IC50）；细胞划痕实验观察药物对肝癌细胞损伤修复能力影响,计算移行愈合率；细胞迁移实验观察药物对肝癌细胞迁移作用,计算其迁移抑制率；应用RT-PCR检测药物作用肝癌细胞后MMP-2、MMP-9基因转录水平的变化。结果1.不同浓度的DDP、CIP单用及二者联合均能抑制BEL-7402细胞的生长,且抑制作用随药物浓度增加而增强,差异有显著性（P<0.01）；DDP的IC50为11.2±0.6μmol/L,CIP的IC50为202.3±4.3μmol/L, DDP联合CIP的IC50区间为9+60～12+250μmol/L；各浓度联合组与相应浓度DDP或CIP单药组相比,抑制率均有显著性差异（P<0.01）；联合组疗效均优于单药组,在一定浓度范围内联合用药表现为相加作用。2. DDP、CIP单用及联合都对BEL-7402细胞的迁移愈合能力表现出一定的抑制作用,效果随着药物浓度的增加而加强,药物组的细胞移行愈合率与对照组相比,除DDP组6μmol/L,P>0.05无显著性差异,其余药物组差异有统计学意义（P<0.05）；DDP和CIP联用比单用效果更明显,除CIP组50μmol/L与联合组6+50μmol/L相比,P>0.05,无显著性差异,其余差异有统计学意义（P<0.01）3. DDP、CIP单用及联合都对BEL-7402细胞的迁移产生抑制作用,药物浓度越大,抑制作用越强,联合用药较单药作用更显著（P<0.01）；药物组的细胞迁移抑制率与对照组相比,差异有显著性意义（P<0.01）4. RT-RCR结果显示DDP、CIP单用或联合处理后BEL-7402细胞的MMP-2、 MMP-9转录受到显著抑制（P<0.01）,联合组的抑制作用更强（P<0.01）。结论1.DDP、CIP单药或联合能够抑制人肝癌BEL-7402细胞的增殖、损伤修复及迁移能力,以联合时更显著,且随着药物浓度的增加,这种作用逐渐增强；2. DDP、CIP二者联合作用于人肝癌细胞BEL-7402具有疗效相加作用；3. DDP、CIP抑制人肝癌细胞BEL-7402的侵袭、迁移能力可能是通过降低MMP-2、 MMP-9基因表达来实现的。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 顺拍、环丙沙星及二者联合对人肝癌BEL-7402细胞增殖、损伤修复及迁移的影响
• 1 实验材料和仪器
• 1.1 细胞株
• 1.2 重要试剂
• 1.3 试剂配制
• 1.3.1 0.01mol/LPBS的配制
• 1.3.2 RPMI-1640培养液的配制
• 1.3.3 培养基的配制
• 1.3.4 MTT深液的配制
• 1.3.5 0.25%胰酶溶液的配制
• 1.3.6 3.31mmol/L（1mg/mL）顺铂储备液的配制
• 1.3.7 20mmol/L环丙沙星储备液的配制
• 1.3.8 胎牛血清
• 1.4 主要仪器和材料
• 2 实验方法
• 2.1 DDP、CIP及二者联合对肝癌BEL-7402细胞增殖的影响
• 2.1.1 人肝癌细胞BEL-7402培养
• 2.1.2 MTT实验
• 2.2 DDP、CIP及二者联合对肝癌BEL-7402细胞损伤修复的影响
• 2.2.1 实验分组
• 2.2.2 细胞划痕实验
• 2.3 DDP、CIP及二者联合对肝癌BEL-7402细胞迁移的影响
• 2.3.1 实验原理
• 2.3.2 实验分组
• 2.3.3 Transwell小室迁移实验
• 2.4 统计学处理
• 3 实验结果
• 3.1 DDP、CIP及二者联合对肝癌BEL-7402细胞增殖的影响
• 3.2 DDP、CIP及二者联合对肝癌BEL-7402细胞损伤修复的影响
• 3.3 DDP、CIP及二者联合对肝癌BEL-7402细胞迁移的影响
• 4 讨论
• 第二部分 顺拍、环两沙星及二者联合对人肝癌细胞BEL-7402损伤修复、迁移机制的研究
• 1 实验材料和仪器
• 1.1 主要试剂
• 1.2 主要仪器
• 2 实验方法
• 2.1 细胞总RNA的提取原理和方法
• 2.1.1 实验原理
• 2.1.2 实验分组
• 2.1.3 实验方法
• 2.2 RNA的鉴定
• 2.3 RNA的逆转录
• 2.4 β-actin、MMP-2、MMP-9基因扩增
• 2.5 扩增产物电泳分析
• 2.6 统计学处理
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 第三部分 结论
• 参考文献
• 综述 肝癌治疗新探索
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表文章情况
• 致谢
• 个人简历