大鼠非酒精性脂肪肝CYP2E1和PPARα的变化及甘正复方的影响

论文摘要

目的 非酒精性脂肪性肝炎（NASH）系非酒精性脂肪性肝脏疾病（NAFLD）发展为肝硬化的中间阶段,可能为隐源性肝硬化的重要病因。NASH 的确切发病机制尚不十分清楚,脂肪代谢障碍使肝脏脂肪内环境失去平衡是肝脂肪变性的基础,而氧应激及脂质过氧化则对肝脏炎症和纤维化的形成和发展起重要作用。细胞色素 P4502E1（CYP2E1）及过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）参与脂肪酸氧化、氧应激形成及进一步导致脂质过氧化,对促进肝脏炎症和纤维化起重要作用。目前临床对 NASH 治疗效果尚不理想。本文根据中医理论组成甘正复方,观察其对高脂饮食建立的 NASH 大鼠模型CYP2E1、PPARα的影响,以进一步研究其治疗作用的机制。 方法 1.动物模型的建立及标本采集:30 只 SD 大鼠正常喂养 1周后,随机分成 3 组。正常组（n=10）普通饲料喂养;模型组（n=10）和治疗组（n=10）喂高脂饲料,实验动物自由饮水进食。实验第 13 周起开始灌胃给药。正常组和模型组以生理盐水 10ml/kg 鼠重灌胃,每日一次;治疗组予甘正复方 10ml/kg 鼠重灌胃,每日一次。于实验 16 周自下腔静脉采血后处死,迅速取出肝脏,按常规制备血清、肝匀浆、肝组织石蜡切片标本,肝组织于﹣70℃低温保存。 2.检测指标:血清空腹 ALT、AST、TC、TG 及肝匀浆 TG、TC、MDA 含量、SOD 活性测定;光镜下评估脂肪变性和炎症活动情况;免·2·疫组化法测定 CYP2E1 和 PPARα表达;逆转录聚合酶链反应测定CYP2E1 和 PPARαmRNA 表达。结果 1.体重及肝/体重指数:模型组体重、肝/体重指数分别为 493.20±19.55、3.33±0.74%,较正常组 371.60±31.69、2.89±0.14%显著增加（t=-10.326,-8.763;P 值分别﹤0.01 和 0.05）;甘正复方组 421.80±15.51、2.97±0.10%,与模型组比较明显下降（t=9.047,9.065;P 均﹤0.01）。2.HE 染色观察:正常组大鼠肝细胞无脂肪变性;模型组普遍发生以大泡性为主的脂肪变性;甘正复方组脂肪变性程度积分显著减轻（P值均﹤0.01）。正常组炎症活动度计分为 0;模型组炎症活动度计分 6.80±1.32 明显高于正常组（t= -16.333, P﹤0.01）;治疗组炎症活动度计分 2.80±1.03 较模型组明显减轻（t= 7.559, P﹤0.01）。3.免疫组化法染色:（1）CYP2E1 免疫组化法染色结果:正常组CYP2E1 阳性率为 0;模型组阳性细胞显著增加（P=0.002）,棕黄色颗粒主要分布在中央静脉周围腺泡Ⅲ区,阳性率为 70%;甘正复方组阳性率为 20%,较模型组明显减少（P=0.035）,与正常组比较无明显差异（P=0.287）。（2）PPARα免疫组化法染色结果:正常组见棕黄色颗粒主要分布在汇管区周围肝细胞胞核内;与正常组相比,模型组 PPARα阳性表达细胞明显减少（P<0.01）;治疗组与模型组相比,PPARα阳性表达细胞增多,但二组间无统计学差异（P﹥0.05）。4. CYP2E1 和 PPARαmRNA（A 值）表达:（1）CYP2E1mRNA变化:与正常组 mRNA 1.199±0.028 相比,模型组 2.809±0.020 显著增加（t=-143.280,P﹤0.01）,甘正复方组 2.026±0.029 明显低于模型组（t=70.921;P 值﹤0.01）,但未达到正常组水平（t=-64.928,P﹤0.01）。（2）PPARαmRNA 变化:正常组 mRNA 为 0.641±0.048;与正常组相比,模型组 0.303±0.160（t=22.517,P﹤0.01）;甘正复方组 0.451±0.039 较模型组明显升高（t=-11.086,P﹤0.01）,但与正常组相比仍有显著差异（t=10.082,P﹤0.01）。5.血清生化指标:（1）血清丙氨酸转氨酶（ALT）和门冬氨酸转氨酶（AST）:模型组 ALT、AST 分别为 61.08±5.82、246.62±30.99,

论文目录

• 一、论文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 正文
• （二） 参考文献
• 三、致谢