大鼠咬合创伤早期牙槽骨基因表达差异的初步探讨

论文摘要

咬合创伤是口腔临床常见疾病之一,是由于咬合关系不正常或咬合力量不协调,个别或某几个牙所受的咬合力量超过其牙周组织的耐受力而造成的牙周组织损伤情况,咬合创伤严重者可导致牙槽骨的吸收,牙槽骨吸收是一个复杂的生物过程,涉及成骨细胞、破骨细胞、成千上万细胞因子及其构成的细胞信号传导网络。对咬合创伤导致骨吸收机制的研究是目前口腔医学研究领域的一大热点,其具体分子生物学机制目前尚不清楚,有待进一步研究。本实验希望通过建立大鼠咬合创伤动物模型,观察咬合创伤不同时间大鼠牙周组织破坏情况,并采用全功能组表达谱基因芯片技术对大鼠咬合创伤早期牙槽骨基因表达差异进行初步探讨,进一步明确咬合创伤导致牙槽骨吸收的分子生物学机制。实验一咬合创伤对大鼠牙周组织的影响目的：研究不同作用时间咬合创伤对大鼠牙周组织的影响。方法：通过在大鼠右侧上颌第一磨牙粘接钢丝法建立同侧下颌咬合创伤实验动物模型,分别于24小时、3天、7天、14天后取该侧下颌第一磨牙牙槽骨为实验组,以正常大鼠右侧下颌第一磨牙为对照组,进行X线摄像观察、HE染色、MMP-9免疫组织化学染色,采用单因素方差分析对免疫组织化学染色结果进行统计分析。结果：X线片显示对照组骨小梁清晰,骨硬板连续完整,未见明显骨吸收区。24h组、3天组、7天组未见明显牙周膜增宽,14天组根尖区牙周膜明显增宽。HE染色结果显示：随着咬合创伤时间增加,牙周纤维出现断裂、变性,多核细胞逐渐,出现骨吸收陷窝,且病变随咬合创伤时间延长越来越显著。免疫组织化学染色显示：咬合创伤各组大鼠根周牙槽骨中均见MMP-9阳性染色细胞,且随着咬合升高时间的延长,阳性细胞数目逐渐增多。MMP-9阳性染色细胞百分比24h组与对照组无统计学差异,其余各组与对照组相比皆有统计学差异。结论：X线片、HE染色及免疫组织化学染色结果发现咬合创伤可以导致大鼠牙周组织破坏,且破坏随时间延长越来越严重。实验二大鼠咬合创伤早期牙槽骨基因表达差异的基因芯片研究目的：对大鼠咬合创伤早期牙槽骨基因表达差异进行初步探讨,进一步明确咬合创伤导致牙槽骨吸收的分子生物学机制。方法：建立大鼠咬合创伤动物模型,咬合创伤24h取大鼠双侧下颌牙槽骨组织,提取样本总RNA进行包括27000个基因在内的全功能组表达谱基因芯片检测,对差异表达基因进行Pathway和GO分析,并选取代表性基因采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）对芯片结果进行验证。结果：全功能组表达谱基因芯片结果显示,与对侧牙槽骨组织相比咬合创伤侧差异表达基因共有586个,其中表达增强166个,表达降低420个,Pathway分析涉及106个不同的信号通路,GO分析主要涉及270个不同的功能分类,RT-PCR验证与芯片结果一致。结论：通过芯片结果、Pathway及GO分析发现：咬合创伤24h牙槽骨正常的骨平衡状态已经被打破,成骨细胞及相关的成骨活动受到抑制,而此时破骨细胞活性及破骨现象增强尚未显现。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩写词表
• 前言
• 第一部分 咬合创伤对大鼠牙周组织的影响
• 材料与方法
• 1实验材料
• 2实验方法
• 结果
• 1肉眼大体所见
• 2 X线片显示
• 3组织学所见
• 讨论
• 第二部分 大鼠咬合创伤早期牙槽骨基因差异表达的初步探讨
• 材料和方法
• 1实验材料
• 2实验方法
• 结果
• 1.总RNA提取
• 2.芯片杂交
• 3.芯片结果数据分析
• 4. RT-PGR 验证
• 讨论
• 结论
• 附图
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文
• 学位论文评阅及答辩情况表