天葵抗TMV有效成分提取分离及其制剂研究

论文摘要

烟草花叶病毒病是烟草种植业上的重要病害之一,由于植物病毒的绝对寄生性,使其难于防治,目前国内外缺少高效的抗病毒药剂。随着人们生活水平的提高,环境问题备受关注。抗病毒剂向低毒、低残、高效及环境和谐的方向发展是一种趋势。本文从天葵（Semiaquilegia adoxoides（DC）Makino）块根中提取分离抗烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）的活性成分,为植物源抗病毒活性成分的筛选提供重要的理论依据与实践指导。在本实验室以往研究的基础上,通过继续分离纯化天葵有效组分,采用半叶枯斑法进行活性追踪,筛选出天葵萃取物中抗TMV的活性组分TK和有效成分TK-1;经过剂型加工,初步研制出了20%TK水乳剂系列制剂。取得了一些有价值的试验结果。1.本研究对天葵萃取物的化学成分进行了较为系统地预试验。结果表明:天葵初提物中含有糖类、有机酸、蒽醒、酚类、挥发油等成分。2.采用半叶枯斑法测定了天葵萃取物抗TMV的生物活性。生物活性结果表明,天葵萃取物抗TMV的生物活性随处理时间不同而不同,抑制增殖作用结果说明TMV在接触心叶烟后的2h内是其侵染期,2h后TMV已经侵染并已开始大量增殖。治疗作用施药时间以接种后1h处理为最佳。天葵提取物与等量的TMV混合30min后处理可达到最佳钝化作用防治效果。3.研究确定了天葵有效成分提取分离的一般方法和流程,即先将天葵根粉粗提物经石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水依次萃取,然后采用薄层层析和柱层析相结合的方法分离。氯仿萃取物浸膏（B）经过氯仿.甲醇梯度洗脱（83:17）得有效组分B4-3,其保护和治疗作用是52.54%和48.69%;乙酸乙酯萃取物浸膏（C）经过氯仿-甲醇梯度洗脱（75:25）.得有效成分C5-5,其保护和治疗作用为42.98%～62.07%。4.进行了20%TK-1水乳剂系列制剂的研究,初步确定了2号水乳剂的配方及其质量控制指标。该水乳剂有效成分为TK-1,溶剂为二甲亚砜,乳化剂为OX-7513,分散剂为乙二醇,抗冻剂为羧甲基纤维素钠,助剂为pH调节剂、增稠剂、着色剂、气味调节剂。经剂型加工和质量检测,各项质量控制指标良好。5.研究了2号水乳剂在烟叶上的抗TMV生物活性。结果表明,在心叶烟（Nicotiana ghutinosa）上的活体保护、治疗和钝化作用抑制率分别为62.05%、64.28%和68.64%;在普通烟K326（Nicotiana TabIeacum var）上抗TMV的防治效果为68.64%。2号水乳剂的ED50为724.44mg/L,回归方程为y=1.0501x+2（r=0.9874*）。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 植物源抗病毒剂的研究现状与展望
• 1.2 植物化学成分提取和分离方法
• 1.3 农药剂型研究综述
• 1.4 天葵研究综述
• 1.5 本试验的研究意义及设计思路
• 第二章 天葵化学成分预试验
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 供试材料
• 2.1.2 显示剂的配制
• 2.1.3 供试液的制备
• 2.1.4 供试液化学成分检验
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 供试液A亲油性检验
• 2.2.2 供试液B亲油性检验
• 2.2.3 供试液C亲油性检验
• 2.2.4 供试液D亲油性检验
• 2.2.5 供试液E亲油性检验
• 2.3 小结与讨论
• 第三章 天葵粗提物抗TMV有效部位研究
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 供试材料
• 3.1.2 天葵粗提物有效部位的分离
• 3.1.3 供试毒源TMV的提纯及浓度测定
• 3.1.4 天葵粗提物抗TMV活性测定
• 3.1.5 天葵粗提物抑制侵染作用测定
• 3.1.6 天葵粗提物抑制增殖作用测定
• 3.1.7 治疗作用处理时间测定
• 3.1.8 钝化作用处理时间测定
• 3.1.9 活体条件下天葵萃取物对TMV的盆栽生物活性测定
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 提纯TMV的浓度
• 3.2.2 TMV的最佳接种浓度
• 3.2.3 天葵粗提物抗TMV活性
• 3.2.4 天葵粗提物抑制侵染作用
• 3.2.5 天葵粗提物抑制增殖作用
• 3.2.6 治疗作用处理时间
• 3.2.7 钝化作用处理时间
• 3.2.8 活体条件下天葵萃取物对TMV活体生物活性
• 3.3 小结与讨论
• 3.3.1 最佳接种浓度的确定
• 3.3.2 抗TMV提取物的筛选方法
• 3.3.3 局部枯斑法实验条件的确定
• 第四章 天葵提取物抗TMV有效成分分离
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 供试材料
• 4.1.2 天葵提取物抗TMV有效部位的提取
• 4.1.3 天葵提取物抗TMV有效部位薄层色谱（TLC）预试验
• 4.1.4 天葵提取物抗TMV有效部位的硅胶柱层析分离
• 4.1.5 天葵提取物抗TMV有效部位的分离流程
• 4.1.6 活体条件下天葵有效组分抗TMV的生物活性
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 活体条件下浸膏B层析物的生物活性
• 4.2.2 活体条件下浸膏B3层析物的生物活性
• 4.2.3 活体条件下浸膏B4层析物的生物活性
• 4.2.4 活体条件下浸膏C层析物的生物活性
• 4.2.5 活体条件下浸膏C4层析物的生物活性
• 4.2.6 活体条件下浸膏C5层析物的生物活性
• 4.3 小结与讨论
• 4.3.1 洗脱剂的选择
• 4.3.2 柱层析的洗脱
• 4.3.3 有效组分和有效成分的确定
• 第五章 天葵抗TMV有效成分的剂型研究
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 供试材料
• 5.1.2 水乳剂的配制
• 5.1.3 水乳剂的加工工艺
• 5.1.4 20%TK水乳剂系列制剂的质量控制指标
• 5.1.5 20%TK水乳剂系列制剂的盆栽生物活性测定
• 5.1.6 2号水乳剂对烟草花叶病毒的防治效果测定
• 5.1.7 2号水乳剂不同浓度抗TMV的盆栽生物活性测定
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 水乳剂的配制
• 5.2.2 20%TK水乳剂系列制剂的配方
• 5.2.3 20%TK水乳剂系列制剂的质量控制指标
• 5.2.4 20%TK水乳剂系列制剂的盆栽生物活性
• 5.2.5 2号水乳剂对烟草花叶病毒的防治效果
• 5.2.6 2号水乳剂不同浓度抗TMV的盆栽生物活性
• 5.3 小结与讨论
• 5.3.1 水乳剂的稳定机理
• 5.3.2 水乳剂的质量控制指标的统一
• 5.3.3 2号水乳剂在K326上对TMV的防治效果
• 5.3.4 2号水乳剂的抗TMV活性的推广应用
• 致谢
• 参考文献
• 附录