论文摘要
目的:观察蟾蜍水提物（Water-soluble extract components of Toad,WECT）对人肝癌细胞株SMMC7721细胞增殖及凋亡情况的影响;检测蟾蜍水提物对SMMC7721细胞株细胞周期的影响,并对其诱导凋亡的相关作用机制进行初步探讨。方法:以不同浓度的蟾蜍水提物作用于肝癌细胞株SMMC7721,应用噻唑蓝还原法（MTT）检测蟾蜍水提物对肝癌细胞株SMMC7721细胞增殖的抑制作用及细胞毒作用;应用倒置显微镜观察蟾蜍水提物对SMMC7721细胞形态学的影响;Annexin V/PI双染色法检测蟾蜍水提物干预后SMMC7721细胞凋亡及坏死的情况;dUTP缺口末端标记技术,即TUNEL法检测蟾蜍水提物干预后SMMC7721细胞的早期凋亡;流式细胞术分析SMMC7721细胞经药物作用后其周期分布情况的变化。结果:（1）.蟾蜍水提物可以明显抑制细胞分裂增殖,其半数抑制浓度约0.065mg/ml,随着浓度增加诱导细胞凋亡时间缩短,程度增加; （2）蟾蜍水提物能显著抑制SMMC7721细胞生长,生长曲线显示WECT组细胞的增殖速度远慢于对照组,不同时段的WECT组细胞抑制率也明显升高（P﹤0.05）;干预后的SMMC7721细胞出现了典型的病理变化,细胞形态由多边形变成圆形,染色质疏松,细胞核溶解,形态学改变具有时间依赖性。（3）细胞凋亡与WECT程浓度和时间依赖关系,随着浓度的增加及时间的延长细胞凋亡比例明显增加,与阴性对照有显著差异（P﹤0.05）。（4）流式细胞仪测定显示细胞周期发生明显改变,细胞分裂阻滞在S期,与阴性对照组比较有显著差异性（P﹤0.05）。结论:1.0.008mg/mL及以上浓度蟾蜍水提物对人肝癌SMMC7721细胞具有显著细胞毒作用,形态学和DNA片段化检测证实蟾蜍水提物诱导的细胞死亡以凋亡为主; 2.蟾蜍水提物对肝癌SMMC7721细胞增殖抑制作用呈浓度、时间依赖性,24、48和72小时的半数抑制浓度分别为:0.214mg/mL、0.065mg/mL、0.023 mg/mL。3 .蟾蜍水提物可以诱导SMMC7721细胞凋亡,且呈现明显的浓度、时间依赖性。4.蟾蜍水提物可以抑制SMMC7721细胞生长,并将细胞周期阻滞于S期,诱导肝癌细胞周期S期阻滞可能是蟾蜍水提物抑制肝癌细胞增殖的机制之一。