蛭弧菌HKM的生物学特性分析及其相关应用研究

论文摘要

蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)是寄生于其他细菌并能导致宿主裂解的一类细菌。对能导致渔业养殖病害和人类食物中毒的致病或者潜在致病菌具有良好的裂解清除效果。本实验采用双层平板法,以E.coli为宿主菌,从海南海口海水泥样中分离纯化得到1株具有典型蛭弧菌特征的纯菌株。通过观测此菌株在DNB双层平板上形成的噬菌斑的形状和特征,同时通过透射电镜观察它们的形态,并对照《伯杰氏细菌鉴定手册》(第九版),可以初步鉴定这株菌为蛭弧菌,并命名为HKM。通过部分16S rRNA PCR扩增、测序、拼接和进化距离分析确认这株细菌的进化位置。选取43株致病或者潜在致病菌作为受试菌,对这株蛭弧菌的裂解能力进行分析。裂解实验的结果表明,蛭弧菌HKM对这43株菌的裂解率为83.7%,对试验所选弧菌的裂解率高达94.4%,表明蛭弧菌HKM裂解致病菌具有种属和菌株特异性。最后,研究了蛭弧菌在大菱鲆养殖中的应用。采用20天的换水周期,不添加蛭弧菌的养殖池为对照组(B组),往水体中添加蛭弧菌的养殖池为蛭弧菌添加组(C组),以生产性的养殖池作为参照(A组),以成活率、增重率、体重平均日增长量、体长增长率、体长平均日增长量、肥满度为判段依据,确定蛭弧菌对大菱鲆生长的影响；对换水前各组养殖水体中所含的弧菌数进行检测。结果表明蛭弧菌添加组的大菱鲆的生长指标和存活率显著高于生产组和对照组(P<0.05)；与生产组相比,蛭弧菌添加组大菱鲆的成活率提高了13.23%,增重率、体重平均日增长量、体长增长率、体长平均日增长量、肥满度分别提高了663%、130.35mg、28.09%、31.82μm、4.99,蛭弧菌添加组的弧菌数明显减少。实验结果表明蛭弧菌能够提高大菱鲆的成活率,促进鱼体生长,且能有效控制养殖水体中的弧菌数。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 蛭弧菌简介
• 1.1.1 蛭弧菌的形态结构及其分类
• 1.1.2 蛭弧菌的分布
• 1.1.3 蛭弧菌的生理特征
• 1.1.4 蛭弧菌的基因组特征
• 1.1.5 蛭弧菌裂解宿主菌的机制
• 1.1.6 蛭弧菌的应用概况
• 1.2 水产养殖病害概况及防治现状
• 1.2.1 水产养殖病害概况
• 1.2.2 水产养殖病害的防治现状
• 1.3 本实验的研究目的和意义
• 第二章 蛭弧菌的分离、纯化与鉴定
• 2.1 引言
• 2.2 材料与仪器
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 试剂
• 2.2.3 培养基
• 2.2.4 溶液
• 2.2.5 仪器和设备
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 宿主菌的培养
• 2.3.2 样品预处理
• 2.3.3 蛭弧菌的分离
• 2.3.4 蛭弧菌的纯化
• 2.3.5 蛭弧菌的电镜观测
• 2.3.5.1 蛭弧菌悬浮液的制备
• 2.3.5.2 透射电子显微镜观测样品的制备
• 2.4 结果与分析
• 2.4.1 蛭弧菌分离、纯化结果与分析
• 2.4.2 蛭弧菌鉴定结果与分析
• 2.5 本章小结与分析
• 第三章 蛭弧菌的分子生物学鉴定
• 3.1 引言
• 3.2 材料与设备
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 试剂
• 3.2.3 培养基
• 3.2.4 溶液
• 3.2.5 仪器和设备
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 蛭弧菌基因组DNA的制备
• 3.3.2 蛭弧菌16SrRNA的基因扩增
• 3.3.2.1 PCR反应体系
• 3.3.2.2 PCR反应步骤
• 3.3.2.3 序列分析
• 3.3.2.4 进化树的构建
• 3.4 结果与分析
• 3.4.1 引物特异性分析
• 3.4.2 蛭弧菌16S rDNA基因扩增
• 3.4.3 蛭弧菌的16S rRNA基因序列系统发育学分析
• 3.5 本章小结
• 第四章 蛭弧菌的裂解谱
• 4.1 引言
• 4.2 材料、试剂和设备
• 4.2.1 材料
• 4.2.2 试剂
• 4.2.3 培养基
• 4.2.4 溶液
• 4.2.5 仪器和设备
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 宿主菌的培养
• 4.3.2 蛭弧菌浓缩液的制备
• 4.3.3 蛭弧菌对宿主菌裂解能力的检测
• 4.4 结果与讨论
• 4.4.2 蛭弧菌裂解能力分析
• 4.5 本章小结
• 第五章 蛭弧菌在大菱鲆养殖中应用的研究
• 5.1 引言
• 5.2 材料与设备
• 5.2.1 材料
• 5.2.2 试剂
• 5.2.3 培养基
• 5.2.4 溶液
• 5.2.5 仪器和设备
• 5.3 实验方法
• 5.3.1 宿主菌的培养
• 5.3.2 蛭弧菌的培养
• 5.3.3 蛭弧菌菌体浓度的测定
• 5.3.4 蛭弧菌的发酵培养
• 5.3.5 大菱鲆的饲养
• 5.3.6 大菱鲆的生长指标及存活率的检测
• 5.3.7 水体中弧菌的检测
• 5.4 结果与讨论
• 5.4.1 发酵液中蛭弧菌的检测
• 5.4.2 大菱鲆的成活率
• 5.4.3 蛭弧菌对大菱鲆生长性能的影响
• 5.4.4 弧菌的检测结果
• 结论与展望
• 结论
• 展望
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间取得的研究成果
• 致谢
• 附件