白鱀豚基因组DNA文库构建及应用 ——兼论哺乳动物C值变异和进化的关系

论文摘要

得益于人类基因组计划（HGP）和其他模式生物基因组计划的顺利实施,生命科学研究领域正面临一个快速发展的契机。相对于其他哺乳动物在分子生物学研究领域的进展,鲸类动物在这方面的工作处于相对落后的局面。而鲸类动物是地球上体型变化最大、分布领域最广阔、在水生态系统食物链中位于顶级的一类哺乳动物,在进化上经历过独特的发展历程,因此具有明显区别于其他哺乳动物的遗传基础。开展鲸类基因组学研究将有助于揭示鲸类动物进化和适应的奥秘。本研究构建了白鱀豚Lipotes vexillifer的基因组文库,并对哺乳动物基因组进化进行了初步探讨。本研究主要结果如下:1)以BAC载体pBeloBAC11为克隆系统,大肠杆菌DH10B为宿主菌,白鱀豚肺组织为基因组DNA来源,构建了白鱀豚的BAC基因组文库。2)对文库进行了鉴定。该文库共包含约有149,000个克隆,平均插入片段大小估计为83kb。3)用PCR的方法对文库进行了筛选。对白鱀豚的4个已知的核序列（α乳白蛋白基因,内光感受器类维生素A结合蛋白基因,短散布子Mago22座位侧翼区序列,和Mos （c-mos）基因的部分序列）进行筛选,分别得到了2,3,4,2个阳性克隆。结果显示,本研究构建的文库具有代表性。4)应用图位克隆技术得到了白鱀豚的α乳白蛋白全基因序列,证明本研究构建的基因组文库适合于白鱀豚的基因克隆。该基因全长1955bp,有4个外显子,通过和其他物种同源基因的比较发现这些外显子的大小、结构和序列具有高度保守性。5)应用CBCS法测定了一定量的BAC克隆的末端序列。从文库中随机挑选了

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 中英文对照
• 第一章 文献综述
• 1 基因组学研究的现状
• 2 基因组进化研究的现状
• 3 基因组文库在基因组学研究中的重要意义
• 4 基于白鱀豚基因组学的研究设想
• 第二章 白鱀豚 BAC 基因组文库构建
• 1 材料和方法
• 2 实验步骤
• 3 结果和讨论
• 第三章 白鱀豚基因组文库的鉴定
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第四章 基因组文库的应用之一：图位克隆α乳白蛋白基因
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第五章 基因组文库的应用之二：BAC 克隆的末端测序
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第六章 白鱀豚和其他六种海兽C 值测定
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第七章 哺乳动物C 值变异的进化关系
• 1 关于非编码DNA 角色的理论和假说
• 2 材料和方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第八章 总结及进一步研究的建议
• 参考文献
• 在学期间文章情况
• 致谢