LXRα通过下调IRF3-GRIP1抑制LPS诱导的Kupffer细胞活化

论文摘要

目的核受体肝X受体（liver X receptor, LXR）α是在肝脏以及巨噬细胞中呈高表达的核受体,它作为诸多基因的转录因子在机体发挥着重要作用。许多实验表明LXRα作为一个转录开关,除了诱导许多参与胆固醇逆转动、肝糖原代谢以及脂肪酸合成的基因外,另外LXRα还抑制了一系列由细菌感染、LPS、TNF-α或IL-1β等因子诱导的炎症基因。但LXRα负性调控炎性基因的表达的具体机制尚不明确。本实验旨在通过观察LXRα激动剂对LPS刺激后Kupffer细胞IRF3、GRIP1、LXRα及炎症因子IFNβ表达的影响,探讨LXRα抑制LPS诱导的Kupffer细胞（KCs）激活效应的可能机制。方法采用密度梯度离心法结合选择性贴壁法分离雄性KM小鼠肝脏中的Kupffer细胞,分离出的Kupffer细胞用含20%FCS的RPMI1640培养液24h后随机分为四组:（1）正常对照组:以RPMI1640完全培养液置孵箱培养30h;（2）LPS处理组:倒掉原培养液,以RPMI1640完全培养液培养24h后,再用含1μg/ml LPS的RPMI1640完全培养液培养6h;（3）T0901317组:倒掉原培养液,用含5μg/ml T0901317的RPMI1640完全培养液培养24h,再以RPMI1640完全培养液培养6h;（4）LPS+T0901317组:倒掉原培养液,以含5μg/ml T0901317的RPMI1640完全培养液培养24h后,再改为含1μg/ml LPS的RPMI1640完全培养液,置孵箱培养6h。收集培养上清液及细胞,采用免疫细胞化学（SABC法）及Western blot法检测Kupffer细胞的LXRα、GRIP1及IRF3蛋白表达水平;SYBR Green I嵌合荧光法Real-Time PCR测定LXRα、GRIP1及IRF3 mRNA表达水平;酶联免疫吸附法（ELISA）检测Kupffer细胞培养上清液中IFNβ含量。结果（1）免疫细胞化学结果:LXRα、IRF3及GRIP1阳性表达均位于核内,阳性被染成棕色。IRF3蛋白在LPS处理组染色最深,联合处理组次之,在正常对照组及LXR激动剂几乎未着色;GRIP1的染色情况与IRF3大致相同;LXRα阳性染色在LXRα激动剂组表达最高,在联合处理组明显降低,在LPS处理组最低。（2）以各指标的log cDNA/logβ-actin比值的x±s表示各指标mRNA平均表达水平。在LPS组中IRF3及GRIP1 mRNA表达量最高（分别为1.089±0.0074、0.8922±0.0095）,联合处理组中其表达明显降低（分别为0.7234±0.0072、0.6905±0.0042）,两组间均数差异均有显著意义（P<0.05）;在LPS组及联合处理组中,IRF3及GRIP1 mRNA水平均高于对照组（分别为0.3558±0.0051、0.3842±0.0083 ）及LXRα激动剂组（分别为0.333±0.0054、0.2778±0.0091）,差异具有统计学意义（P<0.05）;LXRα在LPS组中（0.2722±0.0038）的表达明显低于其它三组（对照组:0.3953±0.0051,联合处理组:0.7963±0.0075,LXRα激动剂组:0.9912±0.0098）,差异具有统计学意义（P<0.05）;LXRα在LXRα激动剂组的表达最高,与其它三组相比具有统计学意义（P<0.05）;联合处理组中,LXRα表达明显低于LXRα激动剂组（P<0.05）,但又显著高于其它两组（P<0.05）。（3）Western blot结果:用内参照对待测物灰度值进行标准校正。IRF3及GRIP1蛋白表达量在LPS组最高（分别为0.388±0.018, 0.276±0.015）,联合处理组表达明显降低（分别为0.318±0.014, 0.224±0.017）,两组间均数差异均有显著意义（P<0.05）;在LPS组及联合处理组中,IRF3及GRIP1蛋白表达量均高于对照组（分别为0.268±0.025、0.162±0.013）及LXRα激动剂组（分别为0.213±0.017、0.133±0.013）,差别具有统计学意义（P<0.05）; LPS组LXRα表达最低（其值为0.534±0.014）,明显低于其它三组（对照组:1.03±0.024,联合处理组:1.224±0.027,LXRα激动剂组:1.74±0.034） ,差别具有统计学意义（P<0.05）;LXRα在LXRα激动剂组的表达最高,与其它三组相比具有统计学意义（P<0.05）;联合处理组中,LXRα表达明显低于LXRα激动剂组（P<0.05）,但又显著高于其它两组（P<0.05）。（4）ELISA结果表明:IFNβ在LPS处理组的含量（329.5±35）显著高于对照组（129.6±17）及LXRα激动剂组（112.8±24）,差异具有统计学意义（P<0.05）;联合处理组IFNβ含量（224.4±33）比LPS处理组明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）;IFNβ表达LXRα激动剂组表达最低。结论本实验结果表明,在应用LPS处理之前预防性应用LXRα激动剂,能明显抑制Kupffer细胞的IRF3及GRIP1表达,且在应用LXRα激动剂后LPS所诱生的炎症因子IFNβ大大降低,进一步说明了LXRα对IRF3通路的抑制。此外,相对于对照组及LXRα激动剂组,在经过LPS处理后,LXRα的表达明显降低,IFNβ表达明显上升。因些,LXRα与IRF3存在相互抑制作用,LXRα能够通过抑制IRF3、GRIP1的表达而发挥抗炎效应,从而抑制LPS所诱导的Kupffer细胞活化。

论文目录

• 英汉缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文：LXRα通过下调IRF3-GRIP1 抑制LPS 诱导的Kupffer 细胞活化
• 前言
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 图片
• 文献综述
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文