论文摘要
目的:通过体内、体外实验研究扇贝裙边糖胺聚糖（SS-GAG）抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的药理活性,并初步探讨其抗病毒作用的机制。方法:1.体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型试验:①以非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）作为宿主细胞,采用体外细胞培养的方法,用细胞病变（CPE）法测定单纯疱疹病毒Ⅰ型的毒力;通过MTT比色法和细胞病变法（CPE）,检测不同浓度SS-GAG对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-ⅠSM44株)的直接杀伤作用、对HSV-Ⅰ复制的抑制作用、对HSV-Ⅰ侵入细胞的阻断作用及对HSV-Ⅰ感染细胞的综合作用等,并观察SS-GAG对Vero细胞的毒性作用及其抑制病毒复制作用的时效关系。②以人宫颈癌（Hela）细胞作为宿主细胞,采用体外细胞培养的方法,通过CPE和MTT比色法,检测不同浓度SS-GAG对HSV-Ⅰ的直接杀伤作用、对HSV-Ⅰ复制的抑制作用、对HSV-Ⅰ侵入细胞的阻断作用及对HSV-Ⅰ感染细胞的综合作用等,并观察药物对Hela细胞的毒性作用。2.体内抗单纯疱疹病毒Ⅰ型试验:通过腹腔注射HSV-Ⅰ,建立小鼠单纯疱疹病毒Ⅰ型感染模型,观察SS-GAG对HSV-Ⅰ感染小鼠存活时间及死亡率的影响,并计算其生命延长率;通过组织学检测,采用HE染色法,经肉眼及光镜下观察SS-GAG对HSV-Ⅰ感染小鼠各组织器官病理形态学的影响。3.对HSV-Ⅰ感染小鼠免疫功能的影响研究:建立小鼠HSV-Ⅰ感染模型,用MTT等方法观察SS-GAG对HSV-Ⅰ感染小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性的影响、对脾淋巴细胞转化增殖的影响以及对脾指数、胸腺指数等免疫指标的影响。结果:1.体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型试验:①经测定病毒的毒力为10-4.7;SS-GAG在25-1600μg/ml浓度范围内对非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）无明显毒性;与病毒对照组相比,SS-GAG各浓度（100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml）能有效保护经HSV-Ⅰ感染的Vero细胞,使细胞活性增强;并减弱HSV-Ⅰ导致的细胞病变效应（CPE）,抑制病毒的复制,阻断HSV-Ⅰ对细胞的侵入（P＜0.01）。但是未发现SS-GAG对HSV-Ⅰ有直接杀伤作用。时效关系研究显示,SS-GAG的抗病毒效应与给药时间有关,在持续给药24小时～72后SS-GAG均能有效保护Vero细胞,使细胞活性增强,随着用药时间的延长,其抗病毒作用增强（P＜0.01）。②SS-GAG在50—800μg/ml范围内对宫颈癌（Hela）细胞无明显毒性作用:与病毒对照组相比,SS-GAG能保护经HSV-Ⅰ感染的Hela细胞,各浓度组（200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml）的细胞活性明显增强,HSV-Ⅰ导致的CPE减弱,病毒的复制受到抑制,HSV-Ⅰ对细胞的侵入被阻断（P＜0.05,P＜0.01）。未发现SS-GAG对HSV-Ⅰ有直接杀伤作用。2.体内抗单纯疱疹病毒Ⅰ型试验:与病毒对照组相比,SS-GAG（10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg）能明显延长HSV-Ⅰ感染小鼠的平均存活时间,降低小鼠的死亡率（P＜0.01）;病理检测结果显示,SS-GAG能减轻HSV-Ⅰ感染小鼠各组织器官的病理损害。3.对HSV-Ⅰ感染小鼠细胞免疫活性的影响研究:SS-GAG（10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg）能显著增强HSV-Ⅰ感染小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性（P＜0.01）,促进脾淋巴细胞转化增殖（P＜0.01）,并且能提高HSV-Ⅰ感染小鼠的胸腺指数（P＜0.01）。结论:扇贝裙边糖胺聚糖在体内外均有一定的抗单纯疱疹病毒Ⅰ型作用。其抗病毒作用可能与其抑制病毒复制和阻断病毒侵入细胞以及增强机体免疫功能有关。