大鼠心肌顿抑模型中血管紧张素Ⅱ受体表达的实验研究

论文摘要

研究背景心肌缺血再灌注（I/R）损伤是指心肌在缺血基础上恢复血流后组织损伤反而加重,甚至发生不可逆损伤的现象。它包括:①再灌注心律失常（RA）;②心肌顿抑（MS）;③冠脉及微血管损伤;④加速心肌坏死等。心肌缺血时,局部血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）产生增多。AngⅡ通过ATR1受体作用调节冠脉张力,促进血管收缩及痉挛,使冠脉血流储备降低;增加再灌注心律失常发生率和持续时间;加重心功能损害;增加肌酸磷酸激酶（CPK）及乳酸脱氢酶（LDH）释放,增加乳酸堆积;使I/R损伤加重。心肌缺血和缺血再灌注后发生左心室功能障碍,使患者生活质量和生存率下降。研究表明,心肌缺血和缺血再灌注后肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）被激活,促进缺血再灌注损伤的病理生理改变。心肌顿抑又称缺血后心肌功能障碍（postischemic myocardial dysfunction）,是缺血再灌注后持续存在的心肌机械性功能障碍,尽管冠状动脉的血流量恢复正常或接近正常,尽管心肌未受到不可逆的损伤。在临床上,心肌顿抑常见于:①急性心肌梗死（AMI）早期再灌注后:AMI溶栓成功后,血栓自溶或紧急PTCA加Stent术后,冠脉血流的恢复可挽救部分濒临坏死的心肌,而使可能的透壁心肌梗死面积缩小或仅表现为心内膜下心肌梗死。但由于再灌注损伤心肌顿抑,心功能改善并不发生于冠脉再通的即刻,而是几天后才逐步出现。②不稳定心绞痛（UAP）:UAP患者通常存在短暂而严重的心肌缺血,缺血缓解后可发生心肌顿抑。③变异型心绞痛:单次发作并立即使用血管扩张剂,通常心肌顿抑不明显。长时问反复发作的变异型心绞痛,特别是伴有T波倒置者,常可有心肌顿抑发生。④运动诱发心肌缺血后,如果短时间多次缺血发作产生累加作用,可产生严重而持续的心功能异常。⑤小面积AMI患者发生难以解释的左心衰竭:可能是因一侧冠脉阻塞经冠-冠反射引起对侧冠脉痉挛,产生缺血后功能障碍。⑥经皮冠脉内成形术（PTCA）:PTCA中的球囊扩张,完全阻塞冠脉,造成暂时性心肌缺血,引起心肌顿抑。多为舒张功能异常,表现为室壁僵硬度增加,顺应性下降。⑦心脏手术后:心脏手术中虽用心脏停搏液、低温等心肌保护措施,心肌仍处于缺血状态,可致心肌顿抑。⑧心脏移植术后:心脏移植前全心缺血及心肌再灌注,术后暂时性血流动力学不稳定很常见,这部分与心肌顿抑有关。血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）在全身各器官发挥着多样化的作用,通过作用于血管紧张素Ⅱ受体（AT）实现其调节血压、水电解质代谢以及参与病理性心肌肥厚形成等作用。近年来,根据AT受体对各种新型非肽类拮抗剂所表现出的不同药理学特性,进一步将AT受体分为两种亚型。本研究旨在研究顿抑时血管紧张素受体表达和功能改变的特点,明确了心肌顿抑的分子机制,不但使我们对缺血性心脏病有进一步的认识,还使我们摸索出预防性治疗措施。随着分子生物学和药理学的深入研究,人们将会深刻认识AT受体对缺血性心脏病的作用机制,必将有利于缺血性心脏疾病的预防和治疗。目的（1）探讨制备大鼠心肌顿抑实验模型;（2）通过缺血后再灌注不同时间进行分组;（3）用免疫组织化学的方法检测血管紧张素Ⅱ受体的在顿抑心肌中的表达情况。本实验旨在观察ATⅡ及其两种亚型ATR1和ATR2在这种损伤中的作用、分布、表达规律。方法48只健康成年雄性SD大鼠随机分成6组,每组8只:A组（阴性对照组）、B组（心肌顿抑再灌注1小时后）、C组（心肌顿抑再灌注4小时后）、D组（心肌顿抑再灌注8小时后）、E组（心肌顿抑再灌注24小时后）、F组（心肌顿抑再灌注3天后）。术前普食正常饲养,体重240～350g,全麻气管插管,接同步心电图（BL—420E生物机能实验系统）,予以左侧旁正中切口开胸结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支15-20分钟后松脱结扎线建立心肌顿抑大鼠动物模型,观察以左室前壁紫绀或呈蓝紫色及同步心电图示S—T段抬高,QRS幅度升高为阻断成功标志。分别于术后1h、4h、8h、24h、3d采集大鼠心脏标本。予HE染色观察心肌组织结构、免疫组化SABC观察心肌ATR1、ATR2细胞定位、表达的动态变化,从而探讨ATⅡ及其两种亚型ATR1和ATR2在这种损伤中的作用、分布、表达规律。结果大鼠心肌顿抑模型心肌组织结构HE染色检查无明显变化,心肌中血管紧张素Ⅱ受体两种亚型ATR1及ATR2动态表达,缺血后早期增高,3天后又有减低的趋势;早期阻断ATR1的作用可能对于心肌顿抑后心功能的恢复有帮助。结论大鼠心肌顿抑损伤后ATR1在4小时后达到峰值,ATR2在1小时后达到峰值,随后两者都表现为动态下降的趋势。

论文目录

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