不同方法处理的同种异体半月板移植实验研究

论文摘要

研究背景：半月板损伤在临床上相当常见。半月板损伤后可导致关节软骨及软骨下骨退变,最终发生骨关节炎。当其严重损伤无法修复时不得不切除,而半月板又是不可缺少的重要组织,近几年半月板移植成为治疗和预防骨关节炎的重要方法。前期研究发现同种异体半月板具有内部自然结构接近受体正常的半月板,移植后的效果最为理想。不同方法处理的同种异体半月板移植效果也不同。新鲜半月板是具有细胞活力的移植物,生物活性最强；新鲜冷冻半月板经冷冻后适合长期保存,但细胞活性降低。本研究将新鲜的半月板和新鲜冷冻的半月板进行移植,观察其纤维软骨细胞数量的变化,以及对胫骨平台软骨的保护效果,为临床应用提供依据。有学者进行了完整的组织工程半月板移植实验研究,但防治骨关节炎的效果尚不理想。组织工程半月板中支架材料是取得良好临床效果的重要因素。目前研究的支架材料多种多样,主要分为天然材料和人工合成材料。天然材料中半月板脱细胞基质是具有相同三维结构和相似内部成分的支架材料。支架材料与半月板细胞外基质越相似,由其构成的组织工程半月板的功能就越好。本研究拟进一步完善制备半月板脱细胞基质的方法,初步观察将关节腔作为生物发生器移植半月板脱细胞基质的效果,为进一步研究打下基础。胫骨平台骨折是常见病,多合并半月板严重损伤。胫骨平台骨折的常见并发症是胫骨平台塌陷和创伤性骨关节炎,多需植骨、垫平胫骨平台塌陷区,严重者甚至需人工关节置换。对于胫骨平台塌陷性粉碎性骨折合并半月板严重损伤的病例,目前还没有良好的治疗方法。本研究采用半月板及同侧的胫骨平台骨软骨一并移植修复胫骨平台毁损伤合并半月板严重损伤的可行性及效果,为临床应用提供依据。方法：第一部分：（1）切取兔内侧半月板,立即置于-80℃快速冰冻,两周后转入-20℃冻存待用。移植前行γ射线照射消毒。（2）新鲜冷冻半月板移植组将准备好的新鲜冷冻半月板,把前角缝合于前交叉韧带胫骨止点,后角缝合于后交叉韧带胫骨止点,体部缝合于内侧副韧带。（3）新鲜半月板移植组手术方法同新鲜冷冻半月板移植组。（4）术后4周、8周、12周取材进行大体观察、HE染色组织学检查、移植半月板纤维软骨细胞计数和胫骨平台软骨氨基己糖含量测定等。第二部分：取兔半月板,浸入到酸性氧化电位水中1小时,蒸馏水冲洗后1%双氧水浸泡1小时,再用蒸馏水冲洗,然后在-10℃低渗冻融48小时,将半月板放入3％Triton-100液中,振摇24小时；蒸馏水冲洗后入6%脱氧胆酸钠液中,振摇24小时；再入3％Triton-100液中,振摇24小时；最后馏水彻底冲洗半月板。成功制备兔半月板脱细胞基质后,对其进行大体形态观察、HE染色、甲苯胺蓝染色、番红花0染色、AB染色、Hoechst-33258染色、Ⅰ型胶原免疫组化染色、天狼星红染色等组织学观察和倒置相差显微镜观察其内部结构。经Y射线消毒后移植于兔内侧胫骨平台。术后8周、16周取材对半月板脱细胞基质行大体形态观察,HE染色组织学观察。第三部分：行兔内侧半月板连同其同侧的胫骨平台骨软骨移植。在内侧胫骨平台下方3mm及髁间脊内侧缘行内侧平台截骨,将内侧半月板及内侧胫骨平台一并切取下,将异体半月板骨软骨联合移植物植于配对的另一兔子的相应位置,两枚直径1mm克氏针由内向外交叉固定骨块。术前、术后1周、术后2周、术后4周和术后8周,分别取外周血。荧光染料R-藻红蛋白标记的鼠抗人CD4单克隆抗体识别外周血中的CD4细胞计数,以研究其免疫学变化。4周时行移植侧股动脉明胶墨汁灌注,观察移植半月板血运重建情况。4周、8周、12周摄膝关节的正侧位X线片了解膝关节骨质变化。HE染色和甲苯胺蓝染色组织学观察移植半月板纤维细胞数量变化情况。结果：第一部分：4周、8周、12周时新鲜半月板移植组半月板细胞数均多于新鲜冷冻组,各时期两组胫骨平台软骨的氨基己糖含量差异无统计学意义。第二部分：制备的半月板脱细胞基质成功脱除半月板中的纤维软骨细胞,半月板脱细胞基质具有较多的微孔。半月板脱细胞基质移植16周后有大量纤维软骨

论文目录

• 目录
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 同种异体新鲜冷冻半月板移植与同种异体新鲜半月板移植的实验研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 兔半月板脱细胞基质移植的实验研究
• 实验一 兔半月板脱细胞基质的制备及形态观察
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 实验二 兔脱半月板细胞基质移植的初步实验研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第三部分 同种异体新鲜半月板与骨软骨联合移植模型的建立与效果观察
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 英文缩略语索引表
• 攻读学位期间发表文章情况
• 致谢