本文主要研究内容
作者杨柳慧（2019）在《细叶百合LpWRKY20基因的克隆及其对烟草的遗传转化》一文中研究指出：细叶百合(Lilium pumilum 花下垂、花被片反卷、花朵娇艳。是一种重要的观赏性花卉,是百合抗性育种的重要亲本。本研究从细叶百合转录组中筛选出WRKY转录因子家族,分析该家族在休眠解除过程中的表达情况;从中选取对休眠解除具有调控作用的基因,分析其对非生物胁迫的响应;克隆该基因并对其进行生物信息学分析;构建植物表达载体转化到烟草中;对转基因植株进行干旱胁迫,通过对干旱胁迫下的表型观察及生理指标测定,明确该基因是否具有抗旱功能。本文主要研究结果如下:1.通过分析细叶百合休眠解除转录组中的WRKY转录因子家族,从中共分离出了40个WRKY转录因子,其中GroupⅠ共有6个基因、GroupII共有28个基因、GroupⅢ有6个基因。随着休眠解除LpWRKY20基因的相对表达量逐渐升高,证明其参与了休眠解除的过程。2.在休眠过程中往往伴随着非生物的胁迫,荧光定量分析表明在不同的非生物胁迫中LpWRKY20表达量存在差异且在不同的组织器官中表达模式也不相同。干旱胁迫下LpWRKY20在鳞茎中出现了明显的上调表达,推测基因对干旱的响应较为敏感。3.该基因开放阅读框(ORF)为1899bp,预测编码632个氨基酸。保守结构域分析显示,LpWRKY具有两个高度保守的WRKY结构域属于GroupⅠ组基因。生物信息学分析显示蛋白相对分子量为68.36kDa,理论等电点为5.45,为亲水性蛋白,不含信号肽且没有跨膜结构;亚细胞定位预测显示该基因在细胞核中表达;蛋白二级结构主要以“mixed”型蛋白存在。4.用双酶切法构建pBI121-LpWRKY20-GFP植物表达载体,经农杆菌介导叶盘法将其转入烟草中并获得抗性植株。利用基因枪法将融合表达载体和pBI121-GFP植物表达载体轰入洋葱表皮细胞进行亚细胞定位分析,结果显示融合表达载体只在细胞核中表达。5.转基因植株在干旱胁迫中的SOD活性、CAT活性均高于对照,且随着时间的延长这种清除体内自由基的能力在显著升高,而MDA含量均低于对照,说明转基因植株细胞膜受损程度较低,其具有较强的自我修复能力。干旱条件下生理指标的变化反应了转基因植株抗性要强于对照,初步推断LpWRK具有抗旱的功能。
Abstract
xi xie bai ge (Lilium pumilum hua xia chui 、hua bei pian fan juan 、hua duo jiao yan 。shi yi chong chong yao de guan shang xing hua hui ,shi bai ge kang xing yo chong de chong yao qin ben 。ben yan jiu cong xi xie bai ge zhuai lu zu zhong shai shua chu WRKYzhuai lu yin zi jia zu ,fen xi gai jia zu zai xiu mian jie chu guo cheng zhong de biao da qing kuang ;cong zhong shua qu dui xiu mian jie chu ju you diao kong zuo yong de ji yin ,fen xi ji dui fei sheng wu xie pai de xiang ying ;ke long gai ji yin bing dui ji jin hang sheng wu xin xi xue fen xi ;gou jian zhi wu biao da zai ti zhuai hua dao yan cao zhong ;dui zhuai ji yin zhi zhu jin hang gan han xie pai ,tong guo dui gan han xie pai xia de biao xing guan cha ji sheng li zhi biao ce ding ,ming que gai ji yin shi fou ju you kang han gong neng 。ben wen zhu yao yan jiu jie guo ru xia :1.tong guo fen xi xi xie bai ge xiu mian jie chu zhuai lu zu zhong de WRKYzhuai lu yin zi jia zu ,cong zhong gong fen li chu le 40ge WRKYzhuai lu yin zi ,ji zhong GroupⅠgong you 6ge ji yin 、GroupIIgong you 28ge ji yin 、GroupⅢyou 6ge ji yin 。sui zhao xiu mian jie chu LpWRKY20ji yin de xiang dui biao da liang zhu jian sheng gao ,zheng ming ji can yu le xiu mian jie chu de guo cheng 。2.zai xiu mian guo cheng zhong wang wang ban sui zhao fei sheng wu de xie pai ,ying guang ding liang fen xi biao ming zai bu tong de fei sheng wu xie pai zhong LpWRKY20biao da liang cun zai cha yi ju zai bu tong de zu zhi qi guan zhong biao da mo shi ye bu xiang tong 。gan han xie pai xia LpWRKY20zai lin jing zhong chu xian le ming xian de shang diao biao da ,tui ce ji yin dui gan han de xiang ying jiao wei min gan 。3.gai ji yin kai fang yue dou kuang (ORF)wei 1899bp,yu ce bian ma 632ge an ji suan 。bao shou jie gou yu fen xi xian shi ,LpWRKYju you liang ge gao du bao shou de WRKYjie gou yu shu yu GroupⅠzu ji yin 。sheng wu xin xi xue fen xi xian shi dan bai xiang dui fen zi liang wei 68.36kDa,li lun deng dian dian wei 5.45,wei qin shui xing dan bai ,bu han xin hao tai ju mei you kua mo jie gou ;ya xi bao ding wei yu ce xian shi gai ji yin zai xi bao he zhong biao da ;dan bai er ji jie gou zhu yao yi “mixed”xing dan bai cun zai 。4.yong shuang mei qie fa gou jian pBI121-LpWRKY20-GFPzhi wu biao da zai ti ,jing nong gan jun jie dao xie pan fa jiang ji zhuai ru yan cao zhong bing huo de kang xing zhi zhu 。li yong ji yin qiang fa jiang rong ge biao da zai ti he pBI121-GFPzhi wu biao da zai ti hong ru xiang cong biao pi xi bao jin hang ya xi bao ding wei fen xi ,jie guo xian shi rong ge biao da zai ti zhi zai xi bao he zhong biao da 。5.zhuai ji yin zhi zhu zai gan han xie pai zhong de SODhuo xing 、CAThuo xing jun gao yu dui zhao ,ju sui zhao shi jian de yan chang zhe chong qing chu ti nei zi you ji de neng li zai xian zhe sheng gao ,er MDAhan liang jun di yu dui zhao ,shui ming zhuai ji yin zhi zhu xi bao mo shou sun cheng du jiao di ,ji ju you jiao jiang de zi wo xiu fu neng li 。gan han tiao jian xia sheng li zhi biao de bian hua fan ying le zhuai ji yin zhi zhu kang xing yao jiang yu dui zhao ,chu bu tui duan LpWRKju you kang han de gong neng 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自东北林业大学的杨柳慧，发表于刊物东北林业大学2019-11-18论文，是一篇关于细叶百合论文,转录因子论文,克隆论文,烟草转化论文,抗旱论文,东北林业大学2019-11-18论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自东北林业大学2019-11-18论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。