论文摘要
目的:Wnt/β-catenin信号转导通路异常激活可导致胚胎发育异常和肿瘤发生,如该通路的核心分子β-catenin异常表达与肝癌发生有关。Cyr61是一种细胞外基质相关蛋白,可发挥多种生理功能,包括介导细胞外基质的形成、细胞增殖、分化和黏附、促进细胞迁移和血管形成。近来Cyr61与肿瘤的关系日益受到关注,但与肿瘤发生的确切关系及机理至今不明。本研究首先检测β-catenin与Cyr61在肝癌细胞株和肝癌病例组织中的表达,观察肝癌发生时,Cyr61表达与β-catenin表达的关系。进而以肝癌细胞株HepG2为模型,研究过表达外源性β-catenin和RNA干扰抑制内源性β-catenin表达时,对Cyr61表达调控。通过研究为探讨肝癌发生中β-catenin是否调控了Cyr61表达,进一步揭示Cyr61在肝癌发生中的作用和机制奠定基础,为肿瘤诊断与治疗提供新的肿瘤标志物和基因治疗靶点。方法:1.采用免疫组化SP染色法和RT-PCR检测人肝癌细胞株HepG2、QGY-7701、鼠肝癌细胞株H22和正常肝细胞株L02中β-catenin和Cyr61蛋白水平与mRNA水平的表达。2.采用免疫组化SP染色法检测62例肝细胞肝癌病人癌组织中β-catenin与Cyr61蛋白的表达,统计学方法分析二者与临床病理参数之间的关系,并比较二者的相关性。3.采用RT-PCR检测30例肝细胞肝癌病人癌组织中β-catenin与Cyr61 mRNA的表达水平,并比较二者的相关性。4.应用293细胞扩增重组腺病毒Adβ-catenin、AdGFP、Adsi-β-catenin,构建并扩增RNA干扰对照腺病毒AdSES-hus。5.Adβ-catenin、AdGFP直接感染HepG2细胞,RT-PCR检测感染后的13dβ-catenin和Cyr61的表达变化。6.Adsi-β-catenin、AdSES-hus直接感染HepG2细胞, RT-PCR检测感染后的24dβ-catenin和Cyr61的表达变化。结果:1.正常肝细胞株L02及肝癌细胞株HepG2、QGY-7701、H22中β-catenin与Cyr61 mRNA与蛋白均有表达,二者表达一致率达100%。2.62例肝癌病例组织标本中,85.48%（53/62）β-catenin蛋白过表达,其过表达与静脉浸润、癌灶转移、结节数的多少和AFP有关（P<0.05）,而与肿块大小、癌栓形成之间的关系无统计学意义。77.42%（48/62）Cyr61蛋白过表达,其过表达与静脉浸润、癌灶转移和结节数的多少有关（P<0.05）,而与肿块大小、癌栓形成和AFP的关系无统计学意义。β-catenin蛋白与Cyr61蛋白同时过表达的病例有72.58%（45/62）,同时阴性表达的病例有10%（6/62）,统计学分析显示Cyr61蛋白与β-catenin蛋白表达呈正相关（r=0.435, P<0.05）3.30例肝癌病例组织标本中β-catenin mRNA和Cyr61 mRNA表达率均为100%,根据RT-PCR半定量结果进行统计学分析,β-catenin mRNA表达与Cyr61 mRNA表达呈正相关（r=0.856, P<0.01）4.Adβ-catenin感染的HepG2细胞与AdGFP感染的HepG2细胞相比,β-catenin在感染24h后表达增强,Cyr61在感染后24h表达也随之增强。5.Adsi-β-catenin感染的HepG2细胞与AdSES-hus感染的HepG2细胞相比较,Adsi-β-catenin在感染后48h明显表达下调,Cyr61在48h也明显表达下调。结论:1.β-catenin与Cyr61在肝癌细胞株和肝癌组织中表达高度一致,提示在肝癌中,Cyr61的过表达可能与β-catenin的过表达有关,二者过表达可能在肝癌的发生和侵袭转移中起到重要作用。2.在HepG2细胞中导入β-catenin基因过表达β-catenin后,与对照相比,上调了Cyr61的表达;而在导入si-β-catenin干扰基因后抑制了β-catenin的表达,同时也下调了Cyr61的表达。研究结果表明,在HepG2细胞中,β-catenin调节了Cyr61的表达,提示Wnt/β-catenin信号途径可调控Cyr61表达,Cyr61可能是该信号途径的下游靶基因。
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