葡萄籽原花青素对糖尿病大鼠大脑皮质保护作用的试验研究

论文摘要

目的:探讨葡萄籽原花青素（GSPE）对链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导的糖尿病大鼠大脑皮质损伤的保护作用及其机制。方法:60只雄性Wistar大鼠分为四组:正常对照组（C1,n=10）和正常GSPE治疗组（C2,n=10,GSPE 250 mg/（kg·d））;另外40只大鼠STZ 55mg/kg尾静脉注射以建立糖尿病模型,成模后随机分为2组:糖尿病对照组（DM1,n=8）和糖尿病GSPE治疗组（DM2,n=12,GSPE 250 mg/（kg·d））。稳定一周后开始试验。常规喂养24周,定期检测体重和血糖。24周时处死大鼠,称大鼠体重,采血测空腹血糖、糖化血红蛋白（glycosylated hemoglobin,HbAlc）、糖基化终产物（advanced glycation end products,AGEs）和肝肾功能等血清学指标;光镜下观察大脑皮质形态学变化;逆转录-聚合酶链式反应（Reversetranscriptase coupled to polymerase chain reaction,RT-PCR）和western blot分别用于RAGE和核因子-kappa B（nuclear factor-kappa B,NF-KB）mRNA和蛋白质表达水平的测定;免疫组织化学染色测量糖基化终产物受体（receptor for advanced glycationend products,RAGE）、NF-KB、星形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白质（GFAP）、ICAM-1和VCAM-1的含量变化。结果:（1）体重及血清学指标:糖尿病组较正常对照组体重明显减轻（t=16.791,P＜0.001）,空腹血糖、HbAlc和AGEs明显升高（p＜0.01）,口服GSPE 250 mg/（kg·d）24周后,DM2组较DM1组相比,AGEs下降（t=2.792,P=0.02）,但对于体重、空腹血糖（21.35±3.59 vs.19.04±3.24mmol/L,t=1.494,p=0.153）和HbAlc,二者之间并无统计学差异;（2）大脑皮质形态学观察:光镜下DM1组大鼠大脑皮质神经元数目减少并出现退行性改变,糖尿病治疗组损伤改变较轻;（3）大脑皮质中RAGE和NF-KB mRNA表达:RT-PCR表明,DM1组大鼠大脑皮质中RAGE和NF-KB mRNA水平均较正常对照组升高,而DM2组大脑皮质中RAGE和NF-KB mRNA水平较DM1组下降;（4）大脑皮质中RAGE和NF-KB蛋白质的表达:DM1组RAGE和NF-KB在蛋白质表达上调,GSPE 250mg/（kg·d）治疗24周后,DM2组RAGE和NF-KB蛋白质表达均下调;（5）免疫组织化学:DM1组RAGE、NF-KB、ICAM-1和VCAM-1的灰度值均降低,而其阳性细胞面积增加;GFAP的灰度值较正常对照组降低,而其阳性细胞数目增加。GSPE 250 mg/（kg·d）治疗24周后,与DM1组相比,DM2组RAGE、NF-KB、ICAM-1和VCAM-1的灰度值均增加,而其阳性细胞面积减少;GFAP灰度值升高,而阳性细胞数目减少。结论:AGEs能造成糖尿病大鼠大脑皮质的损伤,GSPE不但能降低糖尿病大鼠血清AGEs,而且能下调糖尿病大鼠大脑皮质中RAGE和NF-KB在mRNA和蛋白质水平上的表达。免疫组织化学半定量分析亦表明,GSPE能下调RAGE、NF-KB、GFAP、ICAM-1和VCAM-1的表达。表明GSPE在糖尿病中枢神经病变,特别是糖尿病脑病中发挥着重要的保护作用。

论文目录

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