奶牛胚胎移植技术对比研究和生产体系建立

论文题目: 奶牛胚胎移植技术对比研究和生产体系建立

论文类型: 博士论文

论文专业: 临床兽医

作者: 吴国利

导师: 赵德明

关键词: 同期发情,高效超数排卵,胚胎冷冻,胚胎移植,活体采卵,胚胎性别鉴定,奶牛

文献来源: 中国农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 牛胚胎移植主要包括:供受体同期发情、供体超数排卵、胚胎冷冻解冻和移植等关键环节,本文通过对影响这些关键环节的技术进行对比研究,进而探讨适宜的生物技术,为奶牛胚胎移植产业化提出高效能、低成本、稳定和操作简便的技术体系;对一些相关的胚胎生物技术,如活体采卵、体外受精、胚胎性别鉴定等技术进行了研究探讨。 本文研究的主要内容:(一) 诱导奶牛同期发情试剂和相关技术的对比研究。(二) 提高牛超数排卵效果技术研究。(三) 牛胚胎移植的主要影响因素研究。(四) 活体采卵(OPU)及体外受精(IVF)技术的应用研究。(五) 奶牛胚胎性别鉴定技术的应用研究。 诱导奶牛同期发情试剂和相关技术的对比研究:用含孕酮阴道栓、PG等几种方法,对不同状况的牛群进行同期发情处理,根据发情率、黄体合格率、受体移植可用率、妊娠率以及超数排卵获取的可用胚数,进行发情程度、效果的对比分析研究。研究结果表明:不同方法的诱导发情完全可以替代自然发情,孕酮阴道栓加PG诱导发情的方法不受发情周期的限制,可以随时进行处理,国产的孕酮海绵栓和进口的CIDR对发情程度的影响差异不显著,用国产孕酮海绵栓完全可以替代进口CIDR,成本下降70%左右:在不同的牛群,营养状况水平较高的牛群同期发情水平极显著高于其他牛群,本结论对胚胎移植的供、受体牛的选择具有重要意义。产犊超过3个月的经产牛的同期发情率都显著高于产犊不足3个月的经产牛的同期发情率(P<0.01)。 提高牛超数排卵效果技术研究:在自然发情周期的第9天,开始注射FOLLITROPIN-V超排处理,超排反应最佳,按不同时间注射相同剂量FOLLITROPIN-V,在第9天注射所获得的受精卵每头平均12枚、可用胚每头平均6.8枚,显著的高于3天、6天、12天所获得的数量(P<0.05); 应用含孕激素阴道拴+雌激素+孕激素处理后,超排效果显著高于单独使用阴道拴组和阴道拴配合孕激素组,说明雌激素对超排具有明显促进作用;应用阴道拴配合雌激素和孕激素处理后超排,与在发情周期的第8-12天开始的传统超排方法比较,结果差异显著(P<0.05);应用进口阴道拴CIDR和国产“牛欢”(海绵阴道栓)配合雌激素和孕激素处理后开始超排,对青年牛和成母牛超排反应均没有差异(P>0.05),国产的阴道海绵栓可以代替进口的CIDR,成本下降70%左右;短期重复超排(间隔25天-28天)处理次数对超排效果与传统方法比较差异不显著(P>0.05),应用阴道拴诱导卵泡波同步发生后开始超排处理后可以提高重复超排处理次数,提高超排效率,增加胚胎年产量,采用重复超排技术,每年超排次数可高达10次,每头牛可年产达60枚以上,而传统方法只能达到4次左右,所获得的可用胚胎也只有24枚左右。 本文就影响牛体内胚胎移植妊娠率的主要因素进行研究分析,结果如下:1.5M乙二醇,10%的甘油和EFS40(玻璃化冷冻液)三种不同的胚胎冷冻法对受体的妊娠率没有明显的差别。在牛胚胎移植产业化中可相互补充,尤其乙二醇作为冷冻保护液,可以达到解冻后直接移植的目的,简化操作,便于大规模推广应用;致密桑椹胚的移植妊娠率略高于早期囊胚和囊胚,但三者的移植妊娠率差异不显著(P>0.05);胚胎与受体的同步差±12小时内不影响受体移植妊娠率,但

论文目录:

摘要

ABSTRACT

目录

略语表

第一章 奶牛胚胎移植技术研究进展

引言

1、牛同期发情

1.1 同期发情原理

1.2 方法

2、超数排卵

2.1 超数排卵的原理

2.2 超排药物和超排方法

2.3 超排方法

3、胚胎冷冻保存

3.1 历史回顾

3.2 胚胎冷冻生物学原理

3.3 胚胎冷冻方法

3.4 胚胎解冻方法

3.5 乙二醇(Ethylene Glycol)冷冻胚胎直接移植(DT)：

3.6 玻璃化冷冻法

4、影响牛胚胎移植妊娠率的因素

4.1 胚胎

4.2 供体和受体的同期性

4.3 受体因素

第二章 牛体外受精与活体采卵技术研究进展

引言

1、卵母细胞体外成熟

2、精子体外获能

3、早期胚胎培养

4、牛的活体采卵技术

第三章 性别控制和胚胎性别鉴定技术研究进展

引言

1、性别控制

2、胚胎性别鉴定

第四章 牛同期发情技术的研究

摘要

1、引言

2、材料与方法

2.1 实验地点：

2.2 实验牛：

2.3 药品：

2.4 实验方法：

2.5 实验数据统计分析

3、实验结果

3.1 育成和经产牛同期发情效果比较实验

3.2 不同营养和饲养管理对诱导经产牛同期发情的影响实验

3.3 在放牧条件下不同同期发情方法对牛同期化发情的比较实验

3.4 舍饲情况下不同同期发情方法对受体母牛同期发情的比较实验

3.5 不同同期发情方法对供体牛超数排卵的影响实验

3.6 不同同期发情方法对受体牛移植妊娠率的影响

4、讨论

5、小结

第五章 牛超数排卵技术的研究

摘要

1、引言

2、材料与方法

2.1 实验时间

2.2 供体牛选择和饲养管理

2.3 主要器械和药品

2.4 超排处理方法

2.5 实验数据统计分析：

3、试验结果

3.1 发情周期的天数对超排效果的影响

3.2 注射Folltropin-V不同天数对超排效果的影响

3.3 配合使用雌激素超排反应试验

3.4 在发情8到12天应用阴道拴+孕激素+雌激素超排处理反应

3.5 用进口阴道拴CIDR与国产“牛欢”处理超排反应对比

3.6 重复超排处理次数对超排效果的影响

4、论论

5、小结

第六章 影响牛胚胎移植妊娠率的因素分析

摘要

1、前言

2、材料与方法

2.1 供体

2.2 受体

2.3 仪器与药品

2.4 超数排卵

2.5 供、受体同期发情

2.6 胚胎冷冻及解冻

2.7 胚胎分割

2.8 胚胎移植

2.9 实验数据统计分析

3、实验结果

3.1 不同冷冻方法对胚胎移植妊娠率的影响

3.2 常规解冻与乙二醇冷冻解冻胚胎直接移植效果比较

3.3 胚胎不同发育阶段对移植妊娠率的影响

3.4 胚胎与受体同步差对胚胎移植妊娠率的影响

3.5 胚胎分割后对移植妊娠率影响

3.6 经产牛与育成牛移植妊娠率比较

3.7 不同饲养管理水平对胚胎移植妊娠率的影响

3.8 不同品种受体牛对胚胎移植妊娠率的影响

4、讨论

5、小结

第七章 奶牛活体采卵(OPU)及体外受精(IVF)的应用研究

摘要

1、前言

2、材料与方法

2.1 活体采卵

2.2 体外受精

3、结果与讨论

3.1 供体牛年龄、采卵频率对采卵效果的影响

3.2 采卵针型号、抽吸负压的影响

3.3 供体状况的影响

3.4 成熟方法的比较

3.5 受精方法的比较

3.6 发育方法的比较

4、小结

第八章 奶牛胚胎性别鉴定技术的应用研究

摘要

1、前言

2、试验材料

2.1 试验仪器和药品

2.2 试验时间、场所、奶牛选择

3、试验方法

3.1 供体奶牛的超排处理和胚胎的收集

3.2 胚胎的取样(又称为胚胎活捡)

3.3 LAMP法鉴定奶牛胚胎性别

3.4 受体牛同期发情处理及性别鉴定后鲜胚的移植

3.5 性别鉴定后胚胎的冷冻和移植

4、结果

4.1 新鲜胚胎和冷冻胚胎的性别鉴定结果比较

4.2 两种采样法对不同发育时期胚胎的损伤程度比较

4.4 不同冷冻方法对胚胎活力的影响

5、讨论

5.1 胚胎采样对胚胎的损伤

5.2 LAMP法鉴定胚胎性别的特点

5.3 常规冷冻和玻璃化冷冻

6、小结

结论

创新点

参考文献

致谢

图版

作者简历

发布时间: 2006-04-05

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