论文摘要
癌症是一种死亡率极高,发病率逐年递增的疾病。由于传统化疗、放疗、手术疗法的效果仍不够理想而且副作用较大,基因治疗作为一种新型的治疗手段正日益受到重视。人的端粒酶催化亚单位（Human telomerase catalytic subunite, hTERT）是端粒酶的核心成分,是迄今发现的一个最为广泛的肿瘤新标志物。在生理条件下,正常人细胞大都没有hTERT活性;而在85%～90%左右的人肿瘤细胞中hTERT活性较高,并且其活性高低与肿瘤的恶性程度相关,这预示着端粒酶可以作为肿瘤基因治疗的理想靶点。本实验利用克隆了的端粒酶催化亚单位核心启动子（hTERT）和血管内皮生长因子增强子（Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF）及治疗基因胸苷激酶（Thymidine Kinase ,TK）,构建复合转录调控序列[VEGF]hTERT。并利用真核表达载体及HSV/TK自杀基因系统对[VEGF]hTERT复合转录调控序列的转录活性及诱导肿瘤细胞凋亡的能力进行了初步的鉴定。结果表明,构建的真核表达载体复合转录调控序列[VEGF]hTERT能启动自杀基因在肺癌细胞A549和肝癌细胞SMMC-7721内正确表达, VEGF增强子能够提高hTERT核心启动子的转录活性。G418筛选携带该载体的两种肿瘤细胞经过GCV前药处理后,结果显示,肺癌细胞A549及肝癌细胞SMMC-7721的增殖皆受到抑制,细胞早期凋亡率和细胞周期均发生一定程度的改变,尤其是在低氧的条件下,肿瘤细胞受到抑制的程度更为明显。本实验首次进行在低氧条件下由复合转录调控序列调控治疗基因在肿瘤细胞内表达及抑制肿瘤效果方面的研究,并比较证实了复合调控序列在肿瘤细胞中启动转录的优越性。