20-HETE经线粒体信号通路诱导心肌细胞凋亡的研究

论文摘要

20-羟二十烷四烯酸（20-HETE）,细胞色素P450s（CYP）ω-羟化酶的花生四烯酸的代谢物,具有重要的血管紧张度调节作用。但是关于20-HETE对心脏的作用报道甚少,尤其在心肌细胞水平的研究更少。为了揭示20-HETE在对心肌细胞凋亡的作用,本文研究了外源20-HETE对培养的乳鼠心肌细胞诱导凋亡的效应及其信号通路,发现20-HETE可以通过线粒体信号通路诱导心肌细胞凋亡。方法与结果:（1）通过FITC-annexin V/propidium iodide （PI）双染的方法检测细胞凋亡率,发现与对照组相比,20-HETE处理后,细胞凋亡率从20.7±0.8%升高到31.7%±2.0%;（2）通过激光共聚焦,利用JC-1做荧光探针,发现20-HETE可以使心肌细胞线粒体膜电位升高,这就意味着线粒体内凋亡信号分子的释放,激活了心肌细胞凋亡的线粒体信号通路。细胞凋亡是细胞程序性死亡,有重要凋亡基因的参与;（3）通过RT-PCR的方法对促凋亡基因Bcl-2和抑凋亡基因Bax mRNA的表达进行了检测,发现20-HETE能引起Bcl-2的表达下调,而Bax的表达上调,Bax蛋白的表达可以进一步促进线粒体凋亡因子的释放;（4）对凋亡蛋白Caspase-3的活性进行了检测,显示20-HETE导致Caspase-3产生增多,进一步证明了凋亡的发生;（5）通过对于[Ca2+]i的测定,发现20-HETE可能通过增加[Ca2+]i引起钙超载,激活了线粒体信号通路,导致心肌细胞发生凋亡,而引起一系列的级联反应。这些结果揭示了20-HETE可以通过线粒体信号通路诱导心肌细胞凋亡,这为进一步研究20-HETE在心脏上的作用做出了理论依据。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 引言
• 材料和方法
• 1. 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要仪器
• 1.3 试剂及药品
• 1.4 主要溶液的配制
• 2. 实验方法
• 2.1 乳鼠心肌细胞的原代培养
• 2.2 MTT比色法测定心肌细胞的凋亡
• 2.3 Annexin V-FITC与PI双染法测定心肌细胞凋亡
• 2.4 心肌细胞线粒体膜电位ΔΨm检测
• 2.5 心肌细胞bcl-2mRNA与baxmRNA表达水平的测定
• 2.6 caspase-3 活性测定及Hoechst的染色
• 2.7 心肌细胞钙离子浓度的测定
• 2.8 统计学方法
• 实验结果
• 1、20 -HETE导致心肌细胞存活率下降
• 2、20 -HETE诱发心肌细胞产生凋亡
• 3、20 -HETE使心肌细胞线粒体膜电位ΔΨm下降
• 4、Bcl-2 与Bax mRNA表达的改变
• 5、Caspase-3 活性的改变和Hoechst染色结果
• 2+]i的影响'>6、20 -HETE对心肌细胞[Ca²⁺]i的影响
• 讨论
• 结论
• 创新点
• 参考文献
• 英文缩写
• 致谢