桑叶中α-葡萄糖苷酶抑制物质的提取方法及其提取物对糖尿病小鼠治疗作用的研究

论文摘要

糖尿病是一种非常普遍的内分泌代谢紊乱疾病,是胰岛素分泌和利用障碍引起的以高血糖为特征的慢性疾病。糖尿病发病率逐年增长,已成为全世界的突出问题。α-葡萄糖苷酶抑制剂是一种新型的口服控制血糖的药物,目前广泛用于临床的有阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇。这类药物可有效控制糖尿病人餐后血糖的升高,从而控制病情的发展和减少糖尿病并发症的发生。桑叶是一种传统中药。已有研究表明桑叶中含有α-葡萄糖苷酶抑制物质,但是如何快速高效的获取这些成分,并且进一步获得更加有效的抑制物还有待进一步研究：利用本实验室较为成熟的α-糖苷酶抑制剂体外筛选模型,对用不同方法提取的桑叶浸膏抑制α-葡萄糖苷酶的活性进行检测,以确定获取高α-糖苷酶抑制活性成分的方法。经实验得出的最佳提取方法为：桑叶用沸水加热提取30min得到水提物,将水提物溶于水取上清液用水-乙酸乙酯萃取,得到的水相经D101大孔树脂层析,用水洗脱,水洗脱液经聚酰胺柱层析,再用水洗脱,得到的水洗脱液经G25凝胶柱层析,再用水洗脱,以50ml作为一组流份,得到S004S-2和S004S-3、S004S-5、S004S-7、S004S-10浓缩物。通过对这四个分段浸膏半数抑制浓度进行检测,结果显示它们对a-葡萄糖苷酶均有有明显抑制作用。将上述最佳提取方法得到的四个桑叶浸膏进行体内实验,通过建立四氧嘧啶导致的小鼠糖尿病模型,分别用混有一定比例浸膏和拜糖苹的饲料饲养样品组和阳性组,模拟糖苷酶抑制剂的实际使用方法进行给药,考察体外实验筛选出的桑叶浸膏对糖尿病小鼠血糖及其他生化指标的影响。发现糖尿病小鼠在经过桑叶浸膏治疗后,血糖明显下降,30天后接近正常水平,体重明显上升,同时对血脂、肾重比和脂质过氧化均有明显的改善作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 糖尿病概述
• 1.1.1 概述
• 1.1.2 糖尿病分类
• 1.1.3 糖尿病发病机制
• 1.1.4 糖尿病治疗药物
• 1.1.5 糖尿病并发症
• 1.2 α-糖苷酶抑制剂研究进展
• 1.2.1 来源、制备
• 1.2.2 三种α-糖苷酶抑制剂简介
• 1.3 单味中药治疗糖尿病研究进展
• 1.4 桑叶药用资源研究进展
• 1.4.1 营养成分及化学成分研究
• 1.4.2 药理作用研究
• 1.5 立题依据
• 第2章 桑叶中α-葡萄糖苷酶抑制物质的提取方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 药品及试剂
• 2.1.2 实验仪器
• 2.1.3 实验动物
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 提取方法的确定
• 2.2.2 测定方法
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 粗提物提取方法的选择结果
• 2.3.2 高抑制率成分进一步分离纯化方法的确定结果
• 2.3.3 最终获取高α-糖苷酶抑制率成分方法的确定结果
• 2.3.4 最佳方法下得到的提取物半数抑制浓度评价结果
• 2.3.5 最佳提取条件路线图
• 2.4 讨论
• 2.4.1 粗提物提取方法的选择
• 2.4.2 高抑制率成分进一步分离纯化方法的确定
• 2.4.3 最终获取高α-糖苷酶抑制率成分方法的确定
• 2.4.4 最佳方法下得到的提取物半数抑制浓度评价
• 2.5 小结
• 第3章 桑叶浸膏对糖尿病小鼠治疗作用的研究
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 药品及试剂
• 3.1.2 实验仪器
• 3.1.3 实验动物、饲料、饲养地点
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 糖尿病模型的建立
• 3.2.2 实验动物分组
• 3.2.3 给药剂量
• 3.2.4 饲料的制作及饲养
• 3.2.5 体重的测定
• 3.2.6 血清样本准备
• 3.2.7 初始血糖的测定
• 3.2.8 给药第15天各项指标的测定
• 3.2.9 30天各项指标的测定
• 3.2.10 数据处理
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 体重
• 3.3.2 血糖
• 3.3.3 超氧化物歧化酶
• 3.3.4 丙二醛
• 3.3.5 甘油三酯
• 3.3.6 总胆固醇
• 3.3.7 肾重比
• 3.4 讨论
• 3.4.1 对体重的影响
• 3.4.2 对血糖的影响
• 3.4.3 对抗氧化性的影响
• 3.4.4 对血脂的影响
• 3.4.5 对肾脏的影响
• 3.5 小结
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的论文