十种不同虫生真菌芽生孢子的形态发生过程和方式

论文摘要

芽生孢子是许多真菌通过出芽方式产生的无性孢子，在液体发酵中主要以这种形式大量繁殖。国内外的真菌杀虫剂工业化生产所使用的液-固双相发酵工艺需要通过高效的液体发酵为固体发酵提供大量活力强、纯度高的芽生孢子作为种子来大量生产分生孢子制剂，而真菌的遗传转化也需要使用高活力的芽生孢子作为目标基因的受体。然而国内外关于虫生真菌芽生孢子的形成过程及形态发生研究较少，因此研究虫生真菌芽生孢子的形态和发生特点具有重要意义。本实验分别对球孢白僵菌，粉棒束孢、蝉棒束孢、环链棒束孢、玫烟色棒束孢、细脚棒束孢、斜链棒束孢、金龟子绿僵菌、蝗绿僵菌和蜡蚧霉等十种常见虫生真菌在液体发酵中的发育情况进行观察，以研究各个菌株在液体发酵过程中的生活史和发育特点。本实验采用最适于不同菌株生长的液体培养基。培养条件为：50mL培养体系，25℃自然光照，130r/min。为清楚观测到各个菌株的发育过程，每隔6h要进行取样在相差显微镜下观察。根据观察结果，十株虫生真菌在液体培养中的发育方式分两种情况：①蝉棒束孢发育过程可以分成五个阶段：Ⅰ、分生孢子膨大期；Ⅱ、分生孢子萌发期；Ⅲ、芽管延长期；Ⅳ、菌丝指数生长期；Ⅴ、菌丝衰老期。其中菌丝指数生长期伴随有少量芽生孢子产生。②其余九种虫生真菌的发育过程可以分成六个阶段：Ⅰ、分生孢子膨大期；Ⅱ、分生孢子萌发期；Ⅲ、芽管延长期；Ⅳ、芽生孢子形成初期；Ⅴ、芽生孢子指数生长期；Ⅵ、菌丝和芽生孢子衰老期。大多数菌株在培养过程中会产生草酸钙结晶。以上十种常见虫生真菌芽生孢子的产生方式有两种类型：①蝉棒束孢在其整个生活史中以菌丝生长为主，芽生孢子产生的数量很少。②其他各种真菌芽生孢子产生方式相似，在菌丝体形成后就开始大量以菌丝出芽或缢缩产生芽生孢子，接着还可通过芽生孢子的出芽或缢缩断裂产生新的芽生孢子。芽生孢子的产生分为三个时期：初期先由菌丝形成芽生孢子；指数期芽生孢子大量增殖，菌丝和芽生孢子都可产生芽生孢子；后期以芽生孢子产新芽生孢子为主要方式。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 虫生真菌资源的多样性及其应用
• 1.1.1 白僵菌
• 1.1.2 绿僵菌
• 1.1.3 棒束孢
• 1.1.4 蜡蚧霉
• 1.2 虫生真菌的形态
• 1.2.1 营养体
• 1.2.2 繁殖体
• 1.2.3 孢子萌发和芽管行为
• 1.2.4 液生分生孢子的研究
• 1.2.5 芽生孢子的研究
• 1.3 虫生真菌次级代谢产物——草酸
• 1.4 总结与展望
• 2 引言
• 2.1 研究的目的意义
• 2.2 研究内容
• 3 材料与方法
• 3.1 材料
• 3.1.1 菌株
• 3.1.2 主要的培养基
• 3.1.3 主要的化学试剂
• 3.1.4 主要实验用具
• 3.1.5 主要的仪器设备
• 3.2 方法
• 3.2.1 菌株和培养基的筛选
• 3.2.2 菌株培养
• 3.2.3 显微观察及相关参数测定
• 3.2.4 图片处理与分析
• 3.2.5 主要实验流程
• 4 结果与分析
• 4.1 培养基筛选结果
• 4.2 十种虫生真菌液体培养的生活史
• 4.2.1 球孢白僵菌 Bb1981
• 4.2.2 粉棒束孢 Pf96
• 4.2.3 环链棒束孢 Pc651
• 4.2.4 玫烟色棒束孢 Pfu100
• 4.2.5 细脚棒束孢 Pt31
• 4.2.6 斜链棒束孢 Pcab28
• 4.2.7 蝉棒束孢 Pci28
• 4.2.8 金龟子绿僵菌 Ma64
• 4.2.9 蝗绿僵菌 Mf21
• 4.2.10 蜡蚧霉 V07
• 4.3 芽生孢子的形态发生
• 4.3.1 芽生孢子形成初期
• 4.3.2 芽生孢子形成指数期
• 4.3.3 芽生孢子衰老期
• 4.3.4 不同虫生真菌芽生孢子进入各个发育阶段的时间
• 4.3.5 蝉棒束孢的芽生孢子形成过程
• 4.4 草酸钙晶体
• 4.5 在液体培养过程中各个参数的测定
• 4.5.1 分生孢子的形态及变化
• 4.5.2 培养液 pH 变化
• 4.5.3 芽生孢子的形态变化
• 5 讨论
• 5.1 关于液体培养基的选择
• 5.2 关于菌株的选择
• 5.3 虫生真菌液体深层培养
• 5.4 芽生孢子的研究
• 5.5 关于草酸钙结晶的研究
• 6 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介
• 在读期间投稿和发表的学术论文