咖啡酸苯乙酯对小鼠免疫功能及脑缺血再灌注损伤的影响

论文摘要

目的:体外研究咖啡酸苯乙酯（Caffeic acid phenethyl ester,CAPE）对小鼠T细胞活化、增殖、细胞周期和凋亡以及胞内Ca2+浓度的影响,探讨其对小鼠T细胞免疫功能的作用;研究CAPE对小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264.7巨噬细胞系（macrophage,Mφ）的增殖、吞噬功能以及产生一氧化氮（NO）的影响,探讨其对小鼠固有免疫功能的作用;建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型,初步探讨CAPE对脑缺血再灌注损伤小鼠的保护作用。方法:以多克隆刺激剂刀豆蛋白A（concanavalin,Con A）刺激T淋巴细胞活化和增殖,利用荧光标记的单克隆抗体双染技术结合流式细胞术检测小鼠T淋巴细胞CD69、CD25的表达情况;Fluo-4/AM染色分析细胞内Ca2+浓度变化情况;CFDA-SE染色法结合流式细胞术检测T淋巴细胞的增殖情况;碘化丙锭（propidium iodide,PI）染色分析细胞周期分布;Annexin-V/PI双染法检测CAPE对由地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡的影响。MTT法检测CAPE对脂多糖（LPS）刺激的Mφ增殖的影响;用免疫荧光微球结合流式细胞术检测CAPE对LPS刺激的Mφ吞噬功能的影响;Griess反应试剂盒检测CAPE对LPS刺激的Mφ产生NO的影响。通过外科手术对小鼠左右侧颈总动脉进行结扎建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型（cerebral ischemia reperfusion injury,CIR/I）,在术前30mins给小鼠尾静脉注射不同剂量的CAPE。干湿重法测小鼠脑组织水含量的变化;Griess反应试剂盒检测小鼠血清中NO浓度变化情况;H2DCFDA染色法结合流式细胞术检测小鼠外周血中性粒细胞胞内反应氧族（reactive oxygen system,ROS）水平变化情况。结果:1.终浓度分别为0.5,1,5,10 mg/L的CAPE对Con A诱导T细胞表面活化标记分子CD69、CD25的表达和细胞内Ca2+浓度有明显的下调作用;CAPE能有效地抑制经Con A刺激48h和72h后T细胞的增殖,其中浓度为10 mg/L的CAPE抑制效果最显著;增加处于凋亡峰的细胞数目,减少处于S期和G2/M期细胞数目;对Dex诱导小鼠胸腺细胞的凋亡起到协同促进作用。2.MTT法检测结果表明,各浓度组的CAPE均能抑制由LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264.7巨噬细胞系的增殖作用;吞噬实验结果显示,CAPE能促进静息状态下的巨噬细胞对荧光微球的吞噬作用,但对经LPS活化后的巨噬细胞对荧光微球的吞噬功能起到了明显的抑制作用;不同浓度的CAPE能有效地下调LPS刺激下的巨噬细胞NO的水平。3.实验结果显示,与伪手术组相比,手术组的小鼠脑组织含水量明显升高,表明手术组的小鼠发生了脑水肿,同时血清中NO和中性粒细胞胞内ROS的水平均明显上升;与手术组相比,CAPE治疗组小鼠NO、ROS的水平以及脑水含量明显降低。结论:1.CAPE能有效地抑制小鼠T细胞的活化和增殖,并阻止T细胞向进入细胞分裂时相,同时又协同促进由Dex诱导胸腺细胞的凋亡作用,表明CAPE是一种潜在的有效的T细胞免疫抑制剂。2.CAPE能有效地抑制巨噬细胞的增殖,对巨噬细胞的吞噬功能发挥着双向调节作用;同时下调了由LPS诱导的巨噬细胞的NO的释放水平,提示了CAPE还对固有免疫有一定的调节作用。3.CAPE作为一种强抗氧化剂在小鼠缺血再灌注损伤中起到了有效的保护作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 目录
• 前言
• 1 咖啡酸苯乙酯的研究背景
• 2 CAPE的药理作用研究进展
• 3 对T细胞体外行为的研究
• 4 巨噬细胞的功能研究
• 5 脑缺血再灌注损伤和自由基
• 6 本课题研究研究的意义和设计思想
• 参考文献
• 第一章 咖啡酸苯乙酯对小鼠T细胞体外行为的影响
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 数据分析与统计
• 4 结果
• 讨论
• 本章小结
• 参考文献
• 第二章 咖啡酸苯乙酯对巨噬细胞功能的影响
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 数据分析与统计
• 4 结果
• 讨论
• 本章小结
• 参考文献
• 第三章 咖啡酸苯乙酯对脑缺血再灌注损伤小鼠的保护作用
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 结果
• 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 附录
• 英文缩写词
• 在学期间发表论文
• 致谢