论文摘要
目的:观察抑制MIF后对人胃癌BGC-823细胞株增殖与凋亡及其p53、Bcl-2蛋白表达的影响,探讨MIF在人胃癌发生发展中的可能作用机制,为临床上以MIF为作用靶点治疗胃癌提供实验依据。方法:采用随机对照研究,以人胃癌细胞株BGC-823细胞为研究对象。实验分成空白对照组,HA（MIF的抑制剂,高分子量的透明质酸钾盐）50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml组及阳性对照组（5-Fu,100μg/ml）,以不同浓度的药物处理细胞48小时后进行实验:以HA的IC50为终浓度,分别处理BGC-823细胞24、48、72小时后进行实验。具体的实验方法:（1）MTT比色法研究以上药物对抑制BGC-823细胞生长的影响;（2）流式细胞术和AO-EB荧光染色研究以上药物对BGC-823细胞凋亡的影响;（3）流式细胞术分析以上药物对BGC-823细胞的细胞周期的影响;（4）半定量RT-PCR法检测以上药物对BGC-823细胞MIF mRNA表达的影响;（5）蛋白质印迹杂交（Western Blot）法检测以上药物对BGC-823细胞MIF蛋白和凋亡相关基因p53、Bcl-2蛋白表达的影响。结果:（1）MTT试验结果显示50～400μg/ml的HA对BGC-823细胞具有生长抑制作用,且这种抑制作用随浓度增高和作用时间的延长而加强,与空白对照组比较,100μg/ml为HA最小有效浓度,阳性对照组的抑制作用最强;（2）AO-EB染色和流式细胞术检测HA对BGC-823细胞凋亡的影响,显示一致的结果:与空白对照组比较,HA最小有效浓度为100μg/ml,细胞的阳性细胞数、凋亡率、破膜率随浓度增高而增高,阳性对照组的阳性细胞数、凋亡率和破膜率均最高;（3）流式细胞术检测细胞周期发现,HA作用细胞48小时后能将细胞阻滞于G0/G1期,与空白对照组比较,最小有效浓度为100μg/ml,这种阻滞作用随浓度增高而加强,阳性对照组的作用最强;（4）半定量RT-PCR法结果显示:细胞MIF mRNA相对表达水平随浓度增高和作用时间的延长而降低,与空白对照组比较,HA最小有效浓度是100μg/ml,阳性对照组MIF mRNA相对表达水平最低;（5）Western Blot法结果显示:细胞p53蛋白表达水平随HA浓度增高和作用时间的延长而增高,细胞MIF和Bcl-2蛋白表达水平随HA浓度增高和作用时间的延长而降低,;与空白对照组比较,HA最小有效浓度是100μg/ml,有效作用时间是48h;阳性对照组MIF和Bcl-2蛋白相对表达水平最低,而p53蛋白的相对表达水平最高。结论:（1）MIF在人胃癌BGC-823细胞表达阳性,HA减少细胞MIF的mRNA及蛋白的表达。（2）抑制人胃癌BGC-823细胞MIF的表达,p53蛋白表达上调,bcl-2蛋白表达下调。（3）抑制人胃癌BGC-823细胞MIF的表达,细胞生长被阻滞在G0/G1期,细胞增殖减少,细胞凋亡增加。
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