论文摘要
目的:人结直肠癌（human colorectal adenocarcinoma,HCRC）在各种恶性肿瘤中是第4位常见的肿瘤,与其他常见恶性肿瘤相比,结直肠癌又以其多原发倾向,及一定的遗传倾向为其特点。其发生发展是涉及多基因改变的逐步过程,其发病与细胞分裂分化异常、基因群的时空表达异常和蛋白质的相互作用有关。因此研究结直肠癌发病相关基因的表达,对研究结直肠癌癌变分子机理且有重要意义。 我们利用抑制性消减杂交结合cDNA芯片技术筛选发现,有两条EST片段（登录号分别为CK570304和BM360862）在基因芯片上表现为直肠癌组织中的表达比自身正常对照的直肠组织明显升高。为进一步研究其与直肠癌的发生发展有何关系,本实验通过对这两个片段所代表的基因在直肠癌组织及正常直肠组织中的表达情况来进行研究,为进一步研究结直肠癌的发病机理提供资料。 方法:本实验研究中通过生物信息学的方法将BM360862这条EST片段作为种子序列,从Genebank数据库中应用电子克隆的方法克隆得到一条新基因,并对其进行了基因定位,染色体分析,基因的组织表达谱分析,及所编码的蛋白质进行了同源性、亚细胞定位和二级结构的预测性分析。利用RT-PCR结合DNA测序技术,对其拼接片进行了实验验证。全长序列呈交Genebank,登录号为AY743663。并进一步采用荧光定量PCR的方法检测了其在直肠癌组织和正常直肠组织中的表达情况。 CK570304所代表的基因是已知的基因调蛋白（Calmodulin,CaM）,钙调蛋白是细胞内Ca2+重要的受体,参与介导细胞内信号传递系统,在细胞增殖、运动、分化、转化、微管组装中都起着重要的作用,特别是在细胞周期中,钙调蛋白的升高和维持高水平,是细胞由GO期进入细胞周期,由Gl期向S期,G2期向M期,和由M期的中期向后期过渡的必要条件。我们对其在直肠癌组织和正常直肠组织中的表达情况,用荧光定量PCR及RT-PCR的方法进行了初步的分析。 结果:对新基因AY743663分析结果,其定位于人类10号染色体的10q25-q26,在137-270位氨基酸之间含有一个CULLIN结构域,并与cullin-3