光合细菌六味地黄汤发酵工艺的优化及其主要成分的研究

论文摘要

光合细菌六味地黄汤是以优选的有益光合细菌作为菌种,加入到中药提取液中,再按照现代发酵工艺制成产品,是一种含有中药活性成分、菌体及其代谢产物的全组分发酵液的新型中药发酵加工制剂。本研究将现代生物技术与传统中药方剂有机地结合起来,将光合细菌引入到六味地黄汤中进行发酵代谢,通过光合细菌的生物转化功能和自身营养价值的利用,以强强联合的方式,挖掘出传统中药方剂的潜在药用价值。本研究首先完成了光合细菌的培养和菌种鉴定,并以光合细菌菌数为考察指标,根据其生长条件的要求,分别以六味地黄汤浓度、代谢pH值、代谢时间、接种量为因素,设计了L9（34）正交试验。由试验结果得出,No.2为光合细菌六味地黄汤制备工艺的最佳条件,为全面深入地开展光合细菌六味地黄汤的药理学和化学成分研究奠定了可靠的基础。然后从药理学方面研究了六味地黄汤经过光合细菌发酵代谢处理后的制剂对免疫功能低下小鼠的免疫增强作用,并与传统六味地黄煎剂进行疗效的比较。通过对比实验结果,验证了No.2为光合细菌六味地黄汤制备工艺的最佳条件,且与同浓度的传统六味地黄煎剂比较,更能显著地增加免疫功能低下小鼠的脾脏重量。进一步采用高效液相色谱方法,通过一系列的比较分析,可以发现经过光合细菌代谢后的六味地黄汤与代谢前的六味地黄汤相比,大部分主要成分发生了变化。且通过光谱匹配,发现其峰面积较大的色谱峰主要是来源于茱萸光合液和丹皮光合液。而且可以看出光合细菌代谢后六味地黄汤的色谱峰数比代谢前的六味地黄汤少,可能是因为经过光合细菌的代谢作用,转化成了小分子物质。因此需要通过高效液相-质谱联用技术来分析鉴定溶液中的主要化合物,这为后续工作指明了研究的方向。中药复方采用微生物发酵法进行制备,具有一般方法所无法比拟的优势,可以为开发新药、提高药物疗效、降低药物毒副作用的研究提供新的手段,为中药的发展开辟新的研究空间。进行中药发酵研究也具有成熟的现实条件,应当成为我国中药现代化研究的内容之一,从而更好地为人类服务。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 1 光合细菌的研究进展
• 2 六味地黄汤的研究进展
• 3 本研究的内容
• 第一章 光合细菌六味地黄汤的工艺研究
• 1 实验材料
• 1.1 药材与仪器
• 1.2 六味地黄汤
• 1.3 光合细菌
• 1.3.1 菌株来源
• 1.3.2 培养基及菌种分离
• 1.3.3 光合细菌扩大培养
• 1.3.4 光合细菌鉴定
• 1.4 培养基
• 2 光合细菌六味地黄汤的工艺研究
• 2.1 光合细菌六味地黄汤
• 2.2 培养条件的考察
• 2.2.1 温度条件
• 2.2.2 供氧条件
• 2.2.3 光照条件
• 2.2.4 培养周期
• 2.2.5 结论
• 2.3 工艺条件优化
• 2.3.1 正交试验设计
• 2.3.2 正交试验结果及分析
• 2.3.3 结论
• 第二章 光合细菌六味地黄汤的药理学研究
• 1 实验材料
• 1.1 药物
• 1.1.1 传统六味地黄煎剂
• 1.1.2 光合细菌六味地黄汤
• 1.1.3 其他
• 1.2 实验动物
• 1.3 实验仪器
• 2 实验方法
• 2.1 建立肾阴虚模型
• 2.2 实验结果
• 2.3 结论
• 3 讨论
• 第三章 光合细菌六味地黄汤的主要成分研究
• 1 仪器与试药
• 1.1 仪器
• 1.2 药品
• 1.3 试剂
• 2 实验方法
• 2.1 样品处理
• 2.1.1 混合对照品溶液的制备
• 2.1.2 供试品溶液的制备
• 2.2 色谱条件
• 2.2.1 柱温
• 2.2.2 检测波长
• 2.2.3 流动相条件
• 2.2.4 进样体积
• 2.3 色谱条件的优化
• 2.3.1 对照品
• 2.3.2 流动相条件
• 2.3.3 检测波长
• 3 实验结果
• 3.1 主要成分的比较
• 3.1.1 六味、六味发酵液和六味光合液的主要成分比较
• 3.1.2 结论
• 3.2 色谱峰的来源
• 3.2.1 六味发酵液色谱峰的来源
• 3.2.2 六味光合液色谱峰的来源
• 3.2.3 调pH 后的六味光合液色谱峰的来源
• 4 讨论
• 第四章 结论与展望
• 1 工艺研究
• 2 药理学研究
• 3 化学成分研究
• 4 展望
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的论文
• 技术路线图
• 中英文对照
• 致谢