人乳头瘤病毒11型L1基因原核表达系统的构建及鉴定

论文摘要

近年来，性传播疾病（STD）逐年增多，而其中尖锐湿疣（CA）的发病率占性病构成比的24.73％，居第二位。人乳头瘤病毒（HPV）型别众多，而尖锐湿疣主要是由HPV 11型引起的。HPV基因组中的晚期区基因L1编码主要衣壳蛋白，具有稳定的免疫原性。在原核表达系统中，L1基因表达后可自行组装成不含病毒DNA的病毒样颗粒（VLPs）。VLPs具有与天然病毒相似的空间构象、免疫特性和生物学活性，因此以L1为保护性抗原构建的疫苗在预防HPV感染方面发挥着重要的作用。本研究首先从天津地区尖锐湿疣患者新鲜组织标本中提取HPV DNA，并用PCR方法对其进行分型，筛选出HPV 11型病毒DNA。用PCR扩增出带有酶切识别位点的EPV11 L1基因片段。利用PCR产物两末端带有的单个A碱基，与带有单个T碱基末端的pMD18-T载体借助碱基互补连接，构建成质粒pMD18T-HPV11L1，并进行了酶切鉴定以及L1基因的PCR鉴定和序列分析。从该质粒中酶切获取L1基因片段，并将其插入带有相同粘性末端的表达载体质粒pET42a构建成表达HPV11L1蛋白的重组表达质粒pET42a-HPV11L1，并对其进行了酶切以及L1基因的PCR鉴定和序列分析。最后对该重组表达质粒pET42a-HPV11 L1在大肠杆菌BL21（DE3）中进行了初步表达。本研究将HPV11型L1基因克隆入pET42a原核表达载体，成功构建了pET42a-HPV11L1，并在大肠杆菌中得到了高效表达，为进一步展开HPV疫苗的研究创造条件。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略语
• 前言
• 第一部分 人乳头瘤病毒11型L1基因原核表达系统的构建
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 1.1 主要试剂
• 1.2 主要溶液配制
• 1.3 主要实验仪器
• 2 方法
• 2.1 含HPV11 L1基因克隆质粒pMD18T-HPV11L1的构建与鉴定
• 2.1.1 尖锐湿疣新鲜组织标本中抽提HPV DNA
• 2.1.2 HPV DNA荧光PCR分型
• 2法制备感受态细菌DH5α'>2.1.3 CaCl₂法制备感受态细菌DH5α
• 2.1.4 PCR扩增HPV11 L1基因
• 2.1.5 回收胶纯化HPV11 L1基因
• 2.1.6 质粒的小量提取
• 2.1.7 HPV11 L1基因和pMD18-T载体的连接与鉴定
• 2.2 含HPV11 L1基因表达质粒pET42a-HPV11L1的构建与鉴定
• 2.2.1 pMD18T-HPV11L1和pET42a的酶切与回收
• 2.2.2 双酶切片段HPV11L1和pET42a的连接与鉴定
• 结果
• 1 含HPV11L1基因克隆质粒pMD18T-HPV11L1的鉴定
• 1.1 质粒pMD18T-HPV11L1的初筛鉴定结果
• 1.2 质粒pMD18T-HPV11L1的鉴定结果
• 1.3 质粒pMD18T-HPV11L1的酶切鉴定结果
• 1.4 质粒pMD18T-HPV11L1的插入片断HPV11L1的序列分析结果
• 2 含HPV11L1基因表达质粒pET42a-HPV11L1的鉴定
• 2.1 质粒pET42a-HPV11L1的鉴定结果
• 2.2 表达质粒pET42a-HPV11L1的酶切鉴定结果
• 2.3 质粒pET42a-HPV11L1的插入片断HPV11L1的序列分析结果
• 第二部分 人乳头瘤病毒11型L1基因在大肠杆菌中的初步表达
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 2 方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 在学期间发表文章