论文摘要
背景心脏移植现已成为一种行之有效的治疗终末期心脏病的手段,随之而来的是供体脏器的匮乏,异种心脏移植被认为可能是一种极有希望的解决途径。相对于同种心脏移植,远缘异种移植遭受更加严重的、不可逆转的排斥反应。免疫抑制药物方面的进展已经极大的促进了移植学,然而伴随着长期的免疫抑制治疗,有幸长期生存的受者会出现严重的并发症和移植物的失活。为促进移植物的长期存活、改善受者的生活质量、减少移植术后单位时间的治疗费用,关键的环节可能是诱导免疫耐受。而随着移植免疫学的进一步研究和发展,诱导免疫耐受已经成为器官移植研究的主要目标。TGF-β1是一种普遍存在的细胞因子,是关系到细胞生长和增殖的至关重要的活性蛋白,在器官移植免疫中起重要的作用。嵌合体是诱导供体特异性免疫耐受的最有效方法之一。在本课题中,我们克隆了大鼠TGF-β1基因,构建了携带目的基因的重组逆转录病毒载体并且在豚鼠骨髓间充质干细胞中稳定表达。通过多次输注豚鼠骨髓细胞和间充质干细胞建立了一种稳定的异基因大鼠嵌合体模型。探讨联合应用嵌合体和TGF-β1逆转录病毒基因治疗是否能够在大鼠中诱导出异种心脏移植的免疫耐受,据此来评估TGF-β1基因和嵌合体在异种移植中的应用前景。方法:1、分离大鼠脾细胞,经PHA（10μg/ml）活化24h后,提取细胞总RNA,根据GenBank公布的大鼠TGF-β1 cDNA序列设计并合成一对引物P1、P2,采用RT-PCR技术克隆大鼠TGF-β1基因,将RT-PCR产物亚克隆到pMD18-T载体经PCR鉴定阳性克隆,并将PCR产物用PstⅠ单酶切鉴定和重组克隆载体进行DNA测序鉴定。2、以测序验证的pMD18-T/TGF-β1为模板,分别利用P3、P6;P5、P4二对引物PCR扩增出目的基因片段PCR1和PCR2;再以PCR1、PCR2为模板,利用P3、P4