论文摘要
人尿胰蛋白酶抑制剂（human Urinary Trypsin Inhibitor, hUTI）是一种Kunitz 型蛋白酶抑制剂,对酸和热比较稳定,对胰蛋白酶、α-糜蛋白酶、粒细胞弹力蛋白酶和纤溶酶等各种丝氨酸蛋白酶有较强的抑制作用,在治疗急性胰腺炎、急性循环衰竭和肿瘤方面具有很大的应用价值。在人类基因组中,UTI 由ambp 基因编码。本研究首次从人胚胎肝组织总RNA 中钓取ambp cDNA 序列,利用基因重组技术构建人ambp cDNA 克隆载体pMD18-T-ambp 及hUTI 表达载体pPICZα-huti。将huti 表达载体转化X-33 毕赤酵母,建立兼具原核系统良好操作性和真核系统后加工性的重组hUTI 毕赤酵母真核表达体系。通过PCR 鉴定和重组hUTI 活力的测定,筛选出高表达重组hUTI 的酵母菌株。结果表明,本研究正确克隆了人ambp cDNA 序列,构建的重组hUTI 毕赤酵母真核表达体系经甲醇诱导可分泌具有胰蛋白酶抑制活性的重组hUTI 蛋白,相对分子量为40kDa;重组hUTI 的表达具有累积效应,产量在一段时间内随表达时间延长而增加;重组hUTI 在毕赤酵母X-33 中表达的最佳pH 值为3.5 左右,本实验获得的重组hUTI 最高表达产量为44mg/L。国内外文献未见相关报道。本研究为基因工程方法生产hUTI 药物提供了实验依据。
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