吴茱萸碱对树突状细胞功能调控的体外实验研究

论文摘要

目的:研究吴茱萸碱对DC生物学功能的调节,为开发具有自主知识产权基于DC的抗炎免疫疗法打下一定基础。从传统中药中寻找新的抗炎药物,并对其药理学作用进行探索和诠释已成为一种趋势。吴茱萸碱为中药吴茱萸的主要生物碱成分,具有多种生物学活性,近年研究表明,它具有明显的抗炎活性。树突状细胞（DC）作为功能最强的专职抗原提呈细胞在启动和连接天然免疫和获得性免疫起着至关重要的作用。在成熟过程中,DC的抗原摄取、抗原提呈、迁移、表型变化以及细胞因子分泌功能影响着整个免疫系统,而吴茱萸碱对DC功能的影响至今尚未见报道,因此,研究吴茱萸碱对DC功能变化的影响对于扭转炎症反应所引起的免疫紊乱有重要意义。方法:分离Balb/c小鼠骨髓细胞,经GM-CSF体外诱导培养10天的未成熟DC细胞（iDC）经不同因素处理并分为:对照组（Ⅰ）、吴茱萸碱组（Evo）（Ⅱ）、内毒素（LPS）组（Ⅲ）、Evo+LPS（Ⅳ）。1.采用混合淋巴细胞反应检测非黏附细胞在吴茱萸碱处理后的小鼠骨髓来源DC刺激下的增殖情况。2. ELISA试验检测小鼠骨髓来源DC与吴茱萸碱在体外共同培养不同时间过程中分泌的IL-10和IL-12的水平。3.流式细胞仪检测吴茱萸碱处理后小鼠骨髓来源DC表面分子CD11c、MHCⅡ、CD40、CD80和CD86。4.基因芯片技术检测吴茱萸碱对DC功能调控相关基因表达的影响。结果:1.与对照组相比,内毒素组和吴茱萸碱组吸光度值明显高于对照组（P<0.05）;吴茱萸碱+内毒素组与吴茱萸碱组相比,吴茱萸碱+内毒素组吸光度值明显高于吴茱萸碱组（P<0.05）;吴茱萸碱组+内毒素组与内毒素相比,吴茱萸碱组吸光度明显高与内毒素组（P<0.05）。2.吴茱萸碱处理前后iDC细胞因子分泌水平都极低,低于检测灵敏度;mDC分别经吴茱萸碱处理24h、48h后,IL-12（P40）、IL-12（P70）和IL-10与处理之前比较,均无明显变化（P>0.05）。3.内毒素组与对照组相比较,MHCⅡ、CD40、CD80表达明显高于对照组（P<0.01,P<0.05）;吴茱萸碱+内毒素组与吴茱萸碱组相比较,吴茱萸碱+内毒素组的MHCⅡ、CD40、CD80和CD86明显高于吴茱萸碱组（P<0.01,P<0.05）;吴茱萸碱组与对照组相比较CD80、CD86（P<0.05）表达明显下调。4.Ⅱ/Ⅰ上调≥2倍基因7个,下调≥2倍基因10个;Ⅲ/Ⅰ上调≥2倍基因37个,下调≥2倍基因12个;Ⅳ/Ⅱ上调≥2倍基因46个,下调≥2倍基因7个;Ⅳ/Ⅲ上调≥2倍基因24个,下调≥2基因2个。结论:1.吴茱萸碱不仅促进了iDC抗原提呈功能,同时也促进了mDC抗原提呈功能。2.吴茱萸碱对iDC、mDC的细胞因子IL-10、IL-12分泌功能无影响。3.吴茱萸碱抑制了iDC部分共刺激分子的表达,对mDC的MHCⅡ分子和共刺激分子无影响。4.吴茱萸碱对DC作用涉及多个基因的表达调控,这些基因控制并影响着DC功能、分化和成熟,为进一步寻找药物靶点,提供了线索。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文：吴茱萸碱对树突状细胞功能调节的实验研究
• 前言
• 第一章 吴茱萸碱对树突状细胞体外抗原提呈功能的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第二章 吴茱萸碱对树突状细胞细胞因子分泌功能的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第三章 吴茱萸碱对树突状细胞表型和共刺激分子表达的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第四章 基因芯片检测吴茱萸碱对树突状细胞功能调控相关基因表达的影响.
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 文献综述：吴茱萸碱药理学研究进展
• 致谢
• 硕士期间发表论文