人血管内皮生长因子(hVEGF41)融合蛋白的表达、纯化及其生物学活性研究

论文摘要

目的:血管内皮细胞生长因子（VEGF）作为一种强有力的血管生长介质,不仅能特异性地作用于血管内皮细胞,刺激细胞分裂、增生和移行,而且在血管成熟和重塑中起着重要作用,从而达到治疗性血管新生的目的。VEGF41 是我们克隆的一种新型VEGF 异构体。本研究拟构建人VEGF41基因的pGEX/VEGF41重组体,在大肠杆菌中表达,获得高效表达的重组hVEGF41蛋白,并进一步研究其功能。方法:采用化学合成法制备hVEGF41基因,插入pGEX-4T-1 融合蛋白表达载体中,构建重组质粒pGEX/VEGF41。经转化宿主菌bcl-2,筛选高效率转化子,摇瓶培养,用IPTG 诱导高效表达蛋白质。表达产物采用谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析和等电聚焦电泳纯化后,用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和鸡胚尿囊膜血管模型测定其生物学活性。结果: SDS-PAGE 分析显示VEGF41蛋白在菌体中表达,0.3mM IPTG 诱导4 小时后蛋白的表达量达高峰。Western Blotting 表明表达产物具有VEGF 抗原性和特异性。VEGF41组细胞生长曲线斜率增加,倍增时间缩短;MTT 比色的吸光度升高（P<0.001）;每个视野的细胞数由PBS 空白组的96±5 增加到178+ 11;FCM 测定S 期细胞比例明显高于单纯低氧培养组细胞（P<0.001）;加速鸡胚尿囊膜血管形成。结论: hVEGF41具有刺激内皮细胞增殖、迁移、抑制其调亡和促进血管生成的生物效应。

论文目录

• 英文缩略词
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分:pGEX/VEGF41原核表达载体的构建、鉴定
• 前言
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分:pGEX/VEGF41在大肠杆菌中的表达、纯化
• 前言
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分:pGEX/VEGF41表达蛋白的活性测定
• 前言
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 致谢
• 综述