本文主要研究内容
作者李燕虹（2019）在《大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子免疫学快速检测方法的研究》一文中研究指出：大豆是一种优良的植物蛋白资源,且必需氨基酸丰富平衡。但大豆中也含有多种抗营养因子和抗原蛋白,若加工或饲用不当,不仅会降低其自身营养,而且可能会对机体造成损害。胰蛋白酶抑制因子是大豆中一类重要的抗营养因子和抗原蛋白,不仅可诱发机体产生超敏反应,而且可和体内的胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶结合,抑制其活性,最终导致消化不良,阻碍生长发育。因此,对其进行检测研究尤为必要。大豆胰蛋白酶抑制因子主要可分为Kunitz胰蛋白酶抑制因子（Kunitz trypisin inhibitor,KTI）和Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子（Bowman-Birk inhibitor,BBI）,其中BBI性质稳定,不易失活去除。本研究以BBI做为免疫原,通过动物免疫及细胞融合等试验,获得免疫学特性良好的兔源多抗和鼠源单克隆抗体,基于两种不同来源的抗体,建立了BBI双抗体夹心ELISA检测方法,并基于单克隆抗体制备了BBI胶体金免疫层析试纸。（1）将BBI作为免疫原,对12周龄的新西兰大白兔进行免疫,免疫结束后心脏采血,对血液进行处理分离血清并纯化,获得BBI兔源多抗,抗体效价和敏感性鉴定结果表明,该抗体效价达到1:1.024×105,IC50为306.76ng/mL。（2）将BBI作为免疫原免疫BALB/c小鼠,经对鼠多抗血清鉴定,挑选多抗血清具有良好免疫学特性的小鼠进行细胞融合,然后筛选获得能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株3B7-B10、7G7-D11。体内诱生腹水法制备单抗后,对其免疫学特性进行鉴定,结果表明2株单抗效价均高于1:4.096×105,3B7-B10半数抑制浓度为83.07ng/mL,7G7-D11半数抑制浓度为186.81ng/mL,亚型均为IgG1型,3B7-B10亲和常数达到了1.13×108L/mol,交叉反应试验和免疫印迹试验表明2株单抗均具有很强的特异性。（3）基于兔源多抗和鼠源单抗3B7-B10,建立了BBI双抗体夹心ELISA检测方法,该方法具有较强的可靠性,标准曲线中BBI浓度与OD450nm值线性关系良好,线性回归方程为y=1.3836x-1.9496,R2=0.9795,线性范围为31.21000ng/mL,检测限为31.6ng/mL,添加回收率在81.38%100.75%,并具有良好的特异性。（4）基于所筛选的免疫学特性良好的鼠源单克隆抗体,结合胶体金免疫层析试纸技术,制备BBI胶体金免疫层析试纸,试纸目测检测限为0.5μg/mL,读条仪机读检测限为0.23μg/mL,对所制备试纸的准确度、特异性进行鉴定,结果表试纸检测性能良好,可用于BBI的快速检测。
Abstract
da dou shi yi chong you liang de zhi wu dan bai zi yuan ,ju bi xu an ji suan feng fu ping heng 。dan da dou zhong ye han you duo chong kang ying yang yin zi he kang yuan dan bai ,re jia gong huo si yong bu dang ,bu jin hui jiang di ji zi shen ying yang ,er ju ke neng hui dui ji ti zao cheng sun hai 。yi dan bai mei yi zhi yin zi shi da dou zhong yi lei chong yao de kang ying yang yin zi he kang yuan dan bai ,bu jin ke you fa ji ti chan sheng chao min fan ying ,er ju ke he ti nei de yi dan bai mei 、yi ning ru dan bai mei jie ge ,yi zhi ji huo xing ,zui zhong dao zhi xiao hua bu liang ,zu ai sheng chang fa yo 。yin ci ,dui ji jin hang jian ce yan jiu you wei bi yao 。da dou yi dan bai mei yi zhi yin zi zhu yao ke fen wei Kunitzyi dan bai mei yi zhi yin zi （Kunitz trypisin inhibitor,KTI）he Bowman-Birkyi dan bai mei yi zhi yin zi （Bowman-Birk inhibitor,BBI）,ji zhong BBIxing zhi wen ding ,bu yi shi huo qu chu 。ben yan jiu yi BBIzuo wei mian yi yuan ,tong guo dong wu mian yi ji xi bao rong ge deng shi yan ,huo de mian yi xue te xing liang hao de tu yuan duo kang he shu yuan chan ke long kang ti ,ji yu liang chong bu tong lai yuan de kang ti ,jian li le BBIshuang kang ti ga xin ELISAjian ce fang fa ,bing ji yu chan ke long kang ti zhi bei le BBIjiao ti jin mian yi ceng xi shi zhi 。（1）jiang BBIzuo wei mian yi yuan ,dui 12zhou ling de xin xi lan da bai tu jin hang mian yi ,mian yi jie shu hou xin zang cai xie ,dui xie ye jin hang chu li fen li xie qing bing chun hua ,huo de BBItu yuan duo kang ,kang ti xiao jia he min gan xing jian ding jie guo biao ming ,gai kang ti xiao jia da dao 1:1.024×105,IC50wei 306.76ng/mL。（2）jiang BBIzuo wei mian yi yuan mian yi BALB/cxiao shu ,jing dui shu duo kang xie qing jian ding ,tiao shua duo kang xie qing ju you liang hao mian yi xue te xing de xiao shu jin hang xi bao rong ge ,ran hou shai shua huo de neng wen ding fen bi kang ti de za jiao liu xi bao zhu 3B7-B10、7G7-D11。ti nei you sheng fu shui fa zhi bei chan kang hou ,dui ji mian yi xue te xing jin hang jian ding ,jie guo biao ming 2zhu chan kang xiao jia jun gao yu 1:4.096×105,3B7-B10ban shu yi zhi nong du wei 83.07ng/mL,7G7-D11ban shu yi zhi nong du wei 186.81ng/mL,ya xing jun wei IgG1xing ,3B7-B10qin he chang shu da dao le 1.13×108L/mol,jiao cha fan ying shi yan he mian yi yin ji shi yan biao ming 2zhu chan kang jun ju you hen jiang de te yi xing 。（3）ji yu tu yuan duo kang he shu yuan chan kang 3B7-B10,jian li le BBIshuang kang ti ga xin ELISAjian ce fang fa ,gai fang fa ju you jiao jiang de ke kao xing ,biao zhun qu xian zhong BBInong du yu OD450nmzhi xian xing guan ji liang hao ,xian xing hui gui fang cheng wei y=1.3836x-1.9496,R2=0.9795,xian xing fan wei wei 31.21000ng/mL,jian ce xian wei 31.6ng/mL,tian jia hui shou lv zai 81.38%100.75%,bing ju you liang hao de te yi xing 。（4）ji yu suo shai shua de mian yi xue te xing liang hao de shu yuan chan ke long kang ti ,jie ge jiao ti jin mian yi ceng xi shi zhi ji shu ,zhi bei BBIjiao ti jin mian yi ceng xi shi zhi ,shi zhi mu ce jian ce xian wei 0.5μg/mL,dou tiao yi ji dou jian ce xian wei 0.23μg/mL,dui suo zhi bei shi zhi de zhun que du 、te yi xing jin hang jian ding ,jie guo biao shi zhi jian ce xing neng liang hao ,ke yong yu BBIde kuai su jian ce 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自河南科技大学的李燕虹，发表于刊物河南科技大学2019-10-25论文，是一篇关于胰蛋白酶抑制因子论文,多克隆抗体论文,单克隆抗体论文,双抗体夹心论文,胶体金免疫层析试纸论文,河南科技大学2019-10-25论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自河南科技大学2019-10-25论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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