论文摘要
目的:本实验在3月龄、18月龄大鼠听觉神经通路形态学研究的基础上,旨在通过对不同年龄大鼠蜗核、听皮层组织蛋白质组的差异分析,初步探讨年龄相关性听力减退大鼠听觉神经通路蛋白质水平的变化,为进一步确定听觉老化相关蛋白打下基础。方法:①通过脑干电反应测听（ABR）,乙酰胆碱酯酶染色耳蜗基底膜铺片,蜗核、听皮层石蜡切片甲苯胺兰染色等方法分别对3月及18月龄大鼠（各10只）8KHz听阈,耳蜗、蜗核、听皮层形态进行对比研究。②应用双向凝胶电泳分离技术（2—DE）、质谱技术（MS）,对3月及18月龄大鼠蜗核及听皮层组织进行蛋白质组差异分析。③应用免疫组化技术验证已鉴定的差异蛋白质点。结果:①ABR检测显示3月龄和18月龄大鼠8KHz听阈分别为14.5±2.84dBSPL和33.5±4.12dBSPL,差异有显著性（P＜0.01）。②形态学研究发现18月龄大鼠耳蜗底回传出神经末梢较3月龄大鼠减少36%,缺失以2、3排外毛细胞为主。耳蜗核神经元数量较3月龄大鼠减少24%,但听皮层神经元数量无明显差异。③蛋白质组差异分析显示:3月龄和18月龄大鼠蜗核、听皮层组织蛋白质组间存在差异,经肽质指纹图谱（PMF）分析初步鉴定了醛缩酶C、γ—氨基丁酸转氨酶、内质网蛋白29、蛋白二硫化异构酶A3、亮氨酸氨基肽酶、NAD依赖性去乙酰基转移酶、神经胶质纤维酸性蛋白、甘油醛—3—磷酸脱氢酶、NADH脱氢酶1α亚复合体10、二氢蝶啶还原酶、谷氨酸脱氢酶、confilin-1和Nipsnap1 13个蛋白质。这些蛋白质可能与听觉系统的老化相关。④通过对已鉴定蛋白质——NAD依赖性去乙酰基转移酶（SirT2）的免疫组化验证,证实该蛋白质在18月龄大鼠蜗核中表达下降。结论:①18月龄大鼠听觉神经通路已有明显老化。②3月龄大鼠和18月龄大鼠蜗核、听皮层组织蛋白质组间存在差异,这些差异表达蛋白质可能与年龄相关性听力减退有关。