论文摘要
目的:探讨兔髓核细胞体外单层培养的适宜条件,并观察一种自行构建的II型胶原支架上立体培养兔髓核细胞的变化和10ng/ml rhTGF-β1对其生物学行为的影响。方法:单层培养:改变单层培养条件（培养瓶是否铺被PLL、培养液pH、胎牛血清浓度、rhTGF-β1浓度）,利用MTT法和细胞计数法,决定兔髓核细胞体外单层培养的适宜条件。支架培养:将兔髓核细胞以5×106/ml接种到II型胶原支架上进行立体培养1w,利用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞形态学变化;分别利用RT-PCR、3H-proline掺入法观察单层培养、立体培养和10 ng/ml rhTGF-β1刺激24小时后兔髓核细胞基因表达水平和总胶原合成的变化。结果:单层培养:（1）兔髓核细胞对培养条件要求较高,其中培养介质是否铺被PLL、培养液的pH、胎牛血清浓度、rhTGF-β1对细胞影响较为明显。铺被PLL明显促进兔髓核细胞贴壁和生长（1.12倍,p<0.01）;pH在6.8～7.2之间,兔髓核细胞生长较好,pH7.0为较适宜培养液pH;rhTGF-β1在5～10 ng/ml范围内呈剂量依赖性促进细胞生长。在确立的适宜条件中培养时,细胞生长良好,电镜结果示细胞器增多。（2）原代兔髓核细胞指数生长期是接种后的8～10d,第一代兔髓核细胞指数生长期是接种后的6～8d。兔髓核细胞体外培养时增殖能力较弱,第一代活性最高。（3）兔髓核细胞单层培养时II型胶原和集聚蛋白聚糖免疫组化染色阳性。支架培养（1）兔髓核细胞可以在II型胶原支架上黏附生长,细胞由单层培养时的多角形变为类圆形。（2）兔髓核细胞在II型胶原支架上培养1周,其II型胶原、集聚蛋白聚糖基因表达水平和总胶原合成较单层培养增加（1.21、1.12、1.11倍,p<0.05、p<0.05、p<0.01）。
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