论文摘要
中药及其复方是中华民族的瑰宝,是我国研发自主创新性新药的重要源泉。中药复方药代动力学的研究有助于揭示复方药效的物质基础及作用机制,对中药的现代化及国际化具有重要意义。本论文选用川芎单味药材和复方小续命汤作为研究对象,对大鼠口服中药提取物和单体成分后单体成分在大鼠体内代谢特征及大鼠口服中药复方总提物和有效成分组后某些有效成分的药代动力学差异进行探索研究,为中药药代动力学研究提供参考和思路。川芎是著名的传统中草药之一,始载于《神农本草经》,主治血淤气滞所致月经不调,痛经经闭,肝郁气滞而致血行不畅的胸胁疼痛,头痛,风寒湿痹,跌打肿痛等疾病。本论文比较了大鼠分别口服川芎挥发油及其中主要成分藁本内酯后的藁本内酯在大鼠体内代谢特征区别,对藁本内酯主要的代谢产物进行了结构鉴定,并探索研究了挥发油对不同亚型CYP450酶的抑制作用。本论文建立了反相高效液相色谱法对大鼠分别口服川芎挥发油及藁本内酯后尿、粪、胆汁中的代谢产物进行分析。色谱条件为:Phenomenex C18（4.6×250 mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈-0.1%冰醋酸水溶液梯度洗脱,流速0.8 mL/min,检测器为二极管阵列检测器（DAD）,全波长扫描,检测波长280 nm,柱温为25℃。结果表明大鼠分别口服挥发油和单体藁本内酯后藁本内酯在大鼠体内主要以代谢产物形式从尿中排出,粪中含少量代谢产物,尿和粪中均未检测到原药。胆汁中代谢产物较少,原药的含量很高。但是值得注意的是大鼠口服挥发油后藁本内酯的代谢产物在数量及相对含量上均与口服藁本内酯单体具有较大差异,说明挥发油中其他成分对主要成分藁本内酯的代谢可能产生了一定的影响。从大鼠尿中检测到7个代谢物,分离得到6个代谢物,根据NMR、MS和MS/MS数据鉴定出其中4个代谢物的结构,分别为川芎内酯Ⅰ（senkyunolideⅠ）,3,5-二羟基-3-丁基苯酞（3,5-dihydroxy-3-butylphthalide）,6-羟基-7-巯甲基藁本内酯（6-hydroxy-7-sulfmethyl ligustilide）,川芎内酯C（senkyunolide C）。实验结果为藁本内酯药代研究和临床应用提供重要参考数据。本论文研究了挥发油对CYP4501A2,2C9,2C19,2D6,2E1,3A4等酶的体外抑制作用,根据推算结果挥发油对CYP4501A2,2C9,2C19,2D6,2E1,3A4等酶的IC50均远大于10μM,表明无抑制作用,为临床安全联合用药提供一定的理论依据。对于小续命汤的药代特性研究,建立了HPLC-MS方法测定大鼠分别口服小续命汤有效成分组和小续命汤总提物后5-O-甲基维斯阿米醇和升麻素在大鼠血浆中的浓度。样品前处理采用乙酸乙酯进行液-液萃取,内标选用非那西丁,色谱柱:InertsilODS-3（2.1 mm×100 mm,3/μm）,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液体系（30:70,V/V）,流速为0.2 mL/min,柱温:30℃;线性离子阱质谱仪,ESI离子源,采用全扫描正离子监测模式,监测的质量数5-O-甲基维斯阿米醇为m/z 290.5-291.5;升麻素为m/z 306.5-307.5;内标非那西丁为m/z 179.5-180.5。5-O-甲基维斯阿米醇和升麻素在血浆中线性范围分别为11.5-230.0ng/mL（r＞0.99）、10.4-936.0 ng/mL（r＞0.99）。日间精密度和日内精密度RSD均小于10.7%。根据5-O-甲基维斯阿米醇和升麻素在血浆中的药时曲线结果表明大鼠口服小续命汤有效成分组后5-O-甲基维斯阿米醇的达峰速度要慢于口服总提物(Tmax（min）:480 versus 360;Cmax（ng/mL）:338.03versus 318.46)。而口服小续命汤有效成分组后升麻素达峰速度快于口服总提物(Tmax（min）:180 versus 420;Cmax（ng/mL）:2018.33 versus 1625.73)。结果表明总提物中非有效成分对有效成分组的药代动力学具有一定影响。实验结果为更深入研究小续命汤在大鼠体内的药代特性提供科学数据,并为传统中药复方的药代动力学研究提供重要参考和研究思路。
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