嗜酸性粒细胞阳离子蛋白检测试剂盒的制备及其临床应用

论文摘要

目的1.制备双抗夹心ELISA（enzyme linked immunosorbent assay,酶联免疫吸附试验）嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（eosinophilia cationic protein,ECP）检测试剂盒。2.对不同的包被方法进行比较。3.评估ECP水平检测在过敏性疾病诊疗中的意义。方法1.双抗夹心ELISA ECP检测试剂盒的制备:（1）葡萄球菌A蛋白亲和层析法纯化抗-ECP单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb）,（2）过碘酸钠法HRP标记抗-ECP多克隆抗体（polyclonal antibody,pAb）,（3）ELISA试剂盒的制备与条件优化,（4）实验效能评价。2.ECP检测试剂盒的方法学比较:（1）抗-ECPmAb的生物素化,（2）BSA的生物素化,（3）先包被生物素的ELISA试剂盒的制备与条件优化,（4）先包被亲和素的ELISA试剂盒的制备与条件优化,（5）比较三种检测方法。3.评估ECP水平检测对过敏性疾病诊疗的意义:（1）评估采血方式对ECP结果的影响,（2）评估ECP检测对过敏性皮肤病诊疗的意义:检测过敏性皮肤病患者血清ECP水平:检测患者总IgE水平,并评估其与ECP的相关性;评估荨麻疹患者治疗前后ECP水平的变化,以及其ECP水平与症状评分、总IgE、特异性IgE相关性;评估异位性皮炎患者疾病症状评分与ECP水平、总IgE、嗜酸性粒细胞（EOS）计数的相关性。4.评估ECP水平检测在过敏性鼻炎诊疗中的意义。结果1.双抗夹心ELISA ECP检测试剂盒的制备:（1）通过对该方法中各种反应条件的摸索和优化,确定了最适工作条件:单抗最适包被浓度1:500稀释,酶标多抗最适浓度为1:8000稀释,最佳封闭液为1%的BSA,最适血清稀释液为稀释液Ⅱ,最佳反应时间为60min,反应温度为37℃。（2）本研究制备的试剂盒线性范围为2.5～200ng/ml,灵敏度为2.75ng/ml,相对偏差为11.5%,批内变异系数＜10%,批间变异系数＜15%,稳定性较好,与ADL试剂盒相比较相关系数为0.97。2.三种方法的比较:（1）生物素亲和素包被法线性范围为2.5～500ng/ml,灵敏度为2.61ng/ml,相对偏差为10.9%;（2）亲和素包被法线性范围为2.5～500ng/ml,灵敏度为2.68ng/ml,相对偏差为11.9%。（3）三种方法的重复性、精确性没有显著性差异,稳定性亲和素包被法最为稳定,抗体包被法次之,生物素包被法最不稳定,抗体直接包被法操作最为简易,但抗体用量最多。3.ECP水平检测对过敏性疾病诊疗的意义:（1）标本采集后37℃放置1h的结果显著高于室温与0℃组,抗凝剂对ECP水平无影响,而标本溶血使ECP水平显著升高。（2）过敏性皮肤

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状与成果
• 研究目的和方法
• 一、ECP检测试剂盒的制备
• 1 对象和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 二、ECP检测试剂盒的方法学比较
• 1 对象和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 三 ECP与过敏性疾病的相关性研究及其应用
• 1 对象和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 嗜酸性阳离子蛋白在变态反应疾病中的应用及其检测
• 综述参考文献
• 致谢