Dnmt1基因shRNA干扰重组体介导的胃癌基因治疗

论文题目: Dnmt1基因shRNA干扰重组体介导的胃癌基因治疗

论文类型: 博士论文

论文专业: 消化内科

作者: 陈道荣

导师: 王丕龙

关键词: 胃癌,重组质粒,胃癌细胞株,增殖凋亡,干扰,基因,短发夹状,胃癌细胞

文献来源: 重庆医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,dnmt)基因主要参与DNA甲基化过程(在基因组 DNA 胞嘧啶上添加甲基基团的过程),其中DNMT1 在成人细胞基因组 DNA 甲基化维护中有着举足轻重的作用。正常组织细胞中,广泛表达的基因启动子区域 CpG 岛常处于非甲基化状态;肿瘤细胞中,这些 CpG 岛常变为甲基化状态,其相关基因的表达亦被关闭。这一观点在对许多基因的研究中也得到了证实,如:肿瘤抑制基因、细胞周期凋亡调节基因、DNA 修复基因、激素受体基因和抑制血管形成基因等。由此可见,DNA 甲基化和肿瘤形成有着密不可分得关系。 RNA 干扰(RNA interfering,RNAi)技术是最近广泛用于抑制基因表达的新技术,主要用于基因功能和基因治疗学等方面的研究。本课题应用 RNAi 技术,研究在人胃癌细胞株 AGS 中转染靶向 dnmt1 基因的 RNAi 重组体后 dnmt1 基因转录水平和 DNMT1 蛋白表达的变化;观察 shRNA 作用后,对 AGS 细胞增殖凋亡的影响;并初步研究其对胃癌裸鼠模型的治疗效果,从而为肿瘤的临床基因治疗在细胞水平、分子水平、整体水平上提供新的理论基础。 目的:利用RNAi技术,构建靶向dnmt1基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)重组质粒,观察其在胃癌 AGS 细胞中抑制 dnmt1基因的表达作用,为进一步研究其对胃癌基因治疗效果打下基础。 方法:设计、合成含 dnmt1 编码基因片段的 siRNA,与转录载体pTZU6+1 连接,构建 pshRNA-dnmt1 重组质粒;转染胃癌细胞株 AGS,用 RT-PCR 法和 Western Blot 法分别检测其对 dnmt1 基因 mRNA 转录水平和蛋白表达水平的影响。 结果:成功地构建靶向 dnmt1 基因的 shRNA 重组质粒pshRNA-dnmt1,并经序列分析得到确证。Western blot 检测结果表明用pshRNA-dnmt1 转染 AGS 细胞后 24h 开始出现 DNMT1 蛋白表达量减少(抑制率为 28.24%);48h 已经比较明显(68.54%);72h 作用最强(81.47%)。RT-PCR检测结果证实重组质粒pshRNA-dnmt1对胃癌AGS细胞中 dnmt1 基因的转录有着明显抑制作用,转染后 24h 抑制率在 73%左右;48h 为 52.97%;72h 为 72.06%。 结论:构建的 pshRNA-dnmt1 重组质粒能有效地抑制 dnmt1 基因在胃癌 AGS 细胞中的表达。

论文目录:

符号说明

中文摘要

英文摘要

前言

参考文献

技术路线－1

技术路线－2

技术路线－3

第一部分 RNA 干扰技术抑制DNA 甲基转移酶1 在胃癌细胞中的表达

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 PshRNA-dnmt1 重组体介导胃癌细胞株AGS 凋亡的体外实验

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 pshRNA-dnmt1 重组体介导胃癌细胞株AGS 凋亡的体内实验

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

全文小结

课题创新性

文献综述 RNA 干扰技术的研究进展

致谢

攻读博士期间发表论文及参加学术会议

申请基金

发布时间: 2005-07-22

参考文献

• [1].宫颈癌PEI-磁性纳米粒E1A基因放化疗增敏及其相关作用机制的实验研究[D]. 申良方.中南大学2005
• [2].Bcl-xl基因在膀胱癌中表达与RNA干扰的实验研究[D]. 林相国.中国医科大学2006
• [3].异常甲基化灭活的胃癌转移抑制相关基因的研究[D]. 王剑峰.中国医科大学2006
• [4].腺病毒5型E1A基因绿色荧光蛋白真核表达载体的构建及其对大肠癌治疗作用的研究[D]. 张学斌.吉林大学2006
• [5].多胺生物合成抑制对HL60细胞分化和凋亡的诱导及相关基因的克隆与表达[D]. 冯立新.中国协和医科大学1995
• [6].正常人肝及人肝癌细胞中N-ras基因的表达调控[D]. 胡晓年.中国协和医科大学1991
• [7].Apmcf1基因在肝癌中的表达及其在细胞周期调节中作用机制的研究[D]. 李擒龙.第四军医大学2006

相关论文

• [1].ShRNA沉默基因DNMT1和DNMT3b对膀胱癌T24细胞生物学行为影响的研究[D]. 张士龙.华中科技大学2009
• [2].RNA干扰沉寂survivin表达及其对肝癌细胞凋亡和相关信号传导通路的影响[D]. 闫歌.重庆医科大学2004
• [3].利用RNA干扰抑制乳腺癌细胞c-Met表达的研究[D]. 赵慧.吉林大学2004
• [4].28个肿瘤相关基因启动子CpG岛甲基化及转录与非小细胞肺癌的相关性的研究[D]. 杨振华.复旦大学2004
• [5].采用RNA干扰技术抑制非小细胞肺癌表皮生长因子受体表达的实验研究[D]. 张敏.复旦大学2004
• [6].应用RNAi技术对肝癌癌基因p28～(GANK)生物学功能的研究[D]. 李洪海.第二军医大学2004
• [7].RNAi干扰CXCR4表达对NCI-H446细胞株恶性潜能影响的实验研究[D]. 杜铭.重庆医科大学2005
• [8].胃癌高发人群体细胞错配修复功能缺陷的研究[D]. 李建华.大连医科大学2005
• [9].应用RNAi技术研究DICER1和E-cadherin基因与胃癌的相关性[D]. 郑志红.中国医科大学2005
• [10].DNMT3B的ICF突变对其DNA甲基转移酶活性的影响[D]. 谢正华.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）2006

标签：胃癌论文;  重组质粒论文;  胃癌细胞株论文;  增殖凋亡论文;  干扰论文;  基因论文;  短发夹状论文;  胃癌细胞论文;