双配体修饰的壳聚糖纳米粒肝癌细胞主动靶向给药系统的研究

论文摘要

肝癌是我国第二位恶性肿瘤，每年死亡人数约11万人，占世界肝癌死亡人数的40％。因此，在我国对肝癌药物治疗方法进行深入的研究显得更为必要。目前研究较热的肝靶向给药系统虽然提高了抗癌药物在肝脏的浓度，降低了药物对正常组织器官的毒副作用，却多数无分辨正常肝细胞与癌变的肝细胞的能力，在杀死癌细胞的同时，也杀死了正常的肝细胞，给肝脏功能造成损伤，如能制备一可靶向至肝癌细胞的给药系统，则可提高抗癌药物在肝脏癌变部位的浓度，降低药物对正常肝组织的毒副作用，使药效和治疗指数进一步提高。 本课题选择中药抗癌有效成分白藜芦醇为模型药物，以壳聚糖（CS）为载体材料，制备壳聚糖纳米粒（CS-NP），并在纳米粒上连接配体生物素Biotin与抗生物素蛋白Avidin，得到双配体修饰的纳米粒A-B-CS-NP。Avidin的N末端含乙酰半乳糖氨和甘露糖残基，通过与肝脏表面半乳糖和甘露糖受体的相互作用，Avidin可介导纳米粒靶向至肝脏；Avidin与Biotin对癌细胞有特殊的亲和力，两个配体可进一步介导纳米粒到达癌细胞，有望实现对肝癌细胞的主动靶向。 为使配体Biotin顺利连接到CS上，采用沉淀法制备CS-NP。用单因素法优化制备工艺，制得的白藜芦醇壳聚糖纳米粒（Res-CS-NP）包封率为65％，载药量为13％，平均粒径为300nm，多分散系数为0.254，体外释放行为可用双指数双向动力学描述。沉淀法制备一般常用硫酸钠溶液作为沉淀剂，制得的微粒粒径多在μm级；而本研究以氯化钠溶液作为沉淀剂，使CS的氨基保持游离，微粒的粒径达到nm级，在制备工艺上具创新性。 使用试剂Sulfo-NHS-Biotin与CS的氨基反应生成生物素化的壳聚糖Bio-CS，采用CS-NP的制备工艺制得Biotin修饰的壳聚糖纳米粒B-CS-NP；在B-CS-NP溶液中，利用Avidin与Biotin之间有很强的亲和力，分别按Biotin：Avidin（2：1）及Biotin：Avidin（1：1）的比例加入Avidin溶液，得到Avidin与Biotin双配体修饰的纳米粒A-B-CS-NP及Avidin修饰的纳米粒A-CS-NP。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 白藜芦醇理化性质研究
• 一 仪器与试药
• 二 实验方法与结果
• （一） 白藜芦醇溶解行为研究
• （二） 白藜芦醇的紫外吸收特征
• （三） 白藜芦醇含量测定方法的建立
• （四） 白藜芦醇有关物质检查
• （五） 白藜芦醇对温度、光线及湿度的稳定性研究
• 三 小结与讨论
• 第二部分 氨基游离的壳聚糖纳米粒制备工艺及相关性质研究
• 一 仪器与试药
• 二 实验方法与结果
• （一） 空白壳聚糖纳米粒制备工艺及相关性质研究
• （二） Res-CS-NP制备工艺及相关性质研究
• （三） Res-CS-NP体外释放试验
• 三 小结与讨论
• （一） 关于空白壳聚糖纳米粒制备工艺及相关性质研究
• （二） 关于Res-CS-NP制备工艺及相关性质研究
• （三） 关于Res-CS-NP体外释放试验
• 第三部分 不同配体修饰的壳聚糖纳米粒制备工艺与相关性质研究
• 一 仪器与试药
• 二 实验方法与结果
• （一） 空白B-CS-NP及A-B-CS-NP制备工艺研究
• （二） 含药B-CS-NP与A-B-CS-NP制备工艺研究
• （三） 含药A-B-CS-NP的冻干针剂制备工艺研究
• 三 小结与讨论
• 第四部分 白藜芦醇壳聚糖纳米粒在小鼠体内分布与药物动力学研究
• 一 仪器、试药与动物
• 二 实验方法与结果
• （一） 白藜芦醇在血浆及各组织中HPLC测定方法研究
• （二） 含药CS-NP、B-CS-NP及A-B-CS-NP与药物溶液静注后在小鼠体内分布研究
• （三） 含药CS-NP,B-CS-NP及A-B-CS-NP与药物溶液静注后在小鼠血液和肝脏中的药物动力学研究
• 三 小结与讨论
• 第五部分 人HepG2肝癌细胞对壳聚糖纳米粒体外摄取特性研究
• 一 仪器与试药
• 二 方法与结果
• （一） FITC标记的纳米粒的制备
• （二） FITC标记的纳米粒相关性质研究
• （三） 细胞生长曲线的绘制
• （四） 细胞摄取试验
• （五） 细胞摄取的定性观察
• 三 小结与讨论
• 第六部分 白藜芦醇壳聚糖纳米粒的体外活性研究
• 一 仪器与试药
• 二 方法与结果
• （一） 细胞培养
• （二） 戊二醛浓度对细胞的抑制作用
• （三） 不同固化程度的CS-NP对细胞的抑制作用
• （四） 空白纳米粒对细胞的抑制作用
• （五） 含药纳米粒对细胞的抑制作用
• （六） 制剂在培养液中的稳定性
• （七） 显微镜观察
• 三 小结与讨论
• 结论
• 致谢
• 主要参考文献
• 综述