牛乳α-乳白蛋白和β-乳球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立

论文摘要

牛乳蛋白过敏症是婴幼儿最为常见的一种食物过敏,它不仅影响婴幼儿的生长发育,发生严重过敏反应时还可导致死亡。研究表明,牛乳α-乳白蛋白及β-乳球蛋白是引起婴幼儿过敏的主要过敏原蛋白,并且微量即可引发严重的过敏反应。因此,建立乳制品及其相关食品中牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白的检测体系对预防牛乳蛋白过敏症具有重大现实意义。本研究采用饱和硫酸铵盐析法并结合DEAE-52阴离子交换色谱分离纯化牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白,采用SDS-PAGE检测表明,所分离纯化的牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白纯度均达理想的抗原纯度标准。以牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,制备了兔抗牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白抗血清,用酶联免疫吸附法检测抗血清效价,均达1:12800。运用免疫印记法检测抗血清的特异性,结果表明所制备的兔抗牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白抗血清的特异性较好,可用于酶联免疫吸附法检测。在优化ELISA条件后,建立了牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白检测的间接竞争ELISA方法。牛乳β-乳球蛋白检测的间接竞争ELISA方法:牛乳β-乳球蛋白理想的包被抗原浓度为1μg/L,抗血清的工作浓度为1:1600,酶标二抗的工作浓度为1:800。回归方程为y=-28.64x+122.5,R2=0.991、最适检测范围为10-1000ng/mL。孔间误差6.25%,板间误差平均为8.15%,检出限为5ng/mL。各项指标均符合ci-ELISA检测的要求,可用于乳制品及其相关食品中牛乳β-乳球蛋白的检测。牛乳α-乳白蛋白检测的间接竞争ELISA方法:牛乳α-乳白蛋白理想的包被抗原浓度为5μg/L,抗血清的工作浓度为1:1600,酶标二抗的工作浓度为1:800。并且得到回归方程为y=-43.24x+166.88,相关系数R2=0.9844,最佳检测范围为50-1000ng/mL。孔间误差5.05%,板间误差:平均为8.92%,检出限为20ng/mL,以上各项指标均符合ci-ELISA检测的要求,可用于乳制品及其相关食品中牛乳α-乳白蛋白的检测。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩写词表
• 第一章 前言
• 1.1 食物过敏
• 1.2 牛乳蛋白过敏症
• 1.3 牛乳中主要过敏原蛋白的过敏原表位的研究进展
• 1.4 食物过敏的阈剂量
• 1.5 食物过敏原的消除方法
• 1.6 食物过敏原的检测方法
• 1.7 本研究的目的和意义
• 1.8 本研究的主要内容及技术路线
• 第二章 牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白的分离纯化
• 2.1 引言
• 2.2 试验材料和方法
• 2.3 试验方法
• 2.4.试验结果
• 2.5 讨论
• 2.6 结论
• 第三章 兔抗牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白抗血清的制备
• 3.1 引言
• 3.2 材料和方法
• 3.3 免抗牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白抗血清的制备
• 3.4 免疫印迹试验（western-blotting）检测抗血清的特异性
• 3.5 结果
• 3.6 讨论
• 3.7 结论
• 第四章 牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立
• 4.1 引言
• 4.2 材料与设备
• 4.3 实验方法
• 4.4 实验结果
• 4.5 讨论
• 4.6 结论
• 第五章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 参考文献
• 已发表综述:婴幼儿牛乳蛋白过敏症的研究进展
• 硕士期间发表的文章
• 致谢