Notch及相关信号传导体系对细胞增殖及分化的调控作用

论文摘要

Notch信号通路作为一个高度保守的信号传导通路,在细胞分化、发育过程中尤其是细胞分化的命运决定中起关键作用。在白血病中发现一类因干细胞功能异常而产生的一群具有自我更新能力的干细胞样细胞,即白血病干细胞（LSC）。LSC的存在成为白血病复发、耐药及难治的一项重要因素。Notch信号通路作用的发挥也必须与其他信号通路相协调完成。Notch信号通路的激活经磷脂酰肌醇—3—羟激酶—丝氨酸/苏氨酸激酶（PI3K-Akt）途径发挥促增殖作用。而Akt下游哺乳动物雷帕霉素靶位（mTOR）是调节细胞增殖的又一重要位点。Notch信号通路及其下游PI3KAkt信号通路、mTOR信号通路在干细胞的自我更新及增殖分化等多方面起重要调节作用。【目的】1、Notch信号通路、mTOR通路、Akt-ERK信号通路抑制剂及其联合应用后对初诊白血病中干/祖细胞的克隆形成能力、自我更新能力、增殖能力、分化水平、分化方向、凋亡水平、细胞增殖周期以及白血病干细胞数量的影响。2、探讨调控造血干细胞（HSC）、LSC自我更新及分化增殖的信号调节机制。3、探索最佳的信号通路抑制剂及其联合应用方案以最大限度的抑制白血病细胞增殖,清除LSC,促进正常HSC的自我更新。【方法】1、经淋巴细胞分离液分离初诊患者骨髓中单个核细胞（MNC）与Notch信号通路抑制剂DAPT、mTOR通路抑制剂雷帕霉素、Akt-ERK信号通路抑制剂Ly294002分组共培养。2、干细胞培养测定克隆形成及自我更新能力,MTT检测细胞增殖水平。瑞特—姬姆萨染色观察细胞形态。3、流式细胞术检测细胞表面CD34;CD38;CD123;CD117;CD11b;CD14的表达水平。4、流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。【结果】1、研究结果显示DAPT、雷帕霉素、Ly294002对细胞增殖、克隆形成及自我更新能力均有抑制作用（P＜0.05有显著统计学差异）。其中DAPT与Ly294002联合应用对细胞自我更新能力的抑制效果优于单用DAPT。2、DAPT、雷帕霉素可减少CD34+细胞比例。DAPT、雷帕霉素、Ly294002均可显著减少CD117+细胞比例,其中DAPT、雷帕霉素联用效果优于单用一种药物。3、CD14、CD11b作为单核细胞标志,未发现信号通路抑制剂的应用能促进白血病细胞向单核细胞系分化。4、DAPT的应用可显著减少CD34+CD38-、CD123+细胞群的数量,而且DAPT与Ly294002联合应用的效果优于单用DAPT。5、DAPT与Ly294002联合应用可诱导细胞早期凋亡及总凋亡增多。6、单用DAPT以及DAPT与Ly294002联合应用可减少S期细胞数量。【结论】1、Notch、Akt-ERK、mTOR信号通路对白血病细胞,甚至是白血病干细胞的增殖、克隆形成、自我更新、凋亡、细胞周期、原始细胞比例均起重要调节作用。2、DAPT尤其是DAPT与Ly294002或DAPT与雷帕霉素联合应用可起到抑制细胞增殖、减少原始细胞数量、清除白血病干细胞、诱导凋亡及细胞周期停滞的作用。

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、正文
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 四、论文综述
• Notch信号及相关信号传导体系对细胞增殖及分化的调控作用
• 五、致谢
• 六、附录
• 附录一 常见英文缩写
• 附录二 在学期间发表论文和会议报告