论文题目: 土贝母皂苷、苷甲的抗癌作用研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 食品科学
作者: 宋刚
导师: 彭志英,马润娣
关键词: 土贝母,土贝母皂苷,土贝母苷甲,微管蛋白,微管,鼻咽癌细胞株
文献来源: 华南理工大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本文以中药材土贝母为原料，采用溶剂法——柱层析法从中分离纯化得到抗癌活性成分土贝母皂苷（皂苷）和土贝母苷甲（苷甲），并重点研究了皂苷、苷甲的抗微管作用及对人低分化上皮样鼻咽癌细胞（CNE-2Z）凋亡的影响。 1．采用（?）KTATM explorer 100快速纯化工艺开拓系统，在实验条件下快速分离得到皂苷和苷甲，为土贝母皂苷成分分离提取工艺的简化作了有益的探索。 2．本文较系统研究了苷甲的抗微管作用，研究认为5μmol／L苷甲即可抑制离体条件下猪脑微管蛋白加热聚合，当其浓度在5～10μmol／L时，苷甲对微管蛋白聚合的抑制作用与苷甲的浓度呈正相关。 3．采用细胞免疫荧光法研究皂苷、苷甲对CNE-2Z细胞微管网络的影响。25μmol／L的皂苷、苷甲作用CNE-2Z细胞3h后，荧光图像显示其结果与2.5μmol／L秋水仙碱作用细胞3h的结果相似，荧光充满整个细胞质区域，正常细胞所具有的毛玻璃样微管网络消失，表明皂苷、苷甲引起细胞微管解聚，2.5μmol／L紫杉醇处理细胞3h后，细胞内荧光主要呈束状或晶核样，提示微管蛋白聚合。 4．采用透射电镜观察皂苷、苷甲对CNE-2Z细胞超微结构的影响。正常培养的细胞结构完整，微管清晰可见；25μmol／L的皂苷、苷甲作用24h后，多数细胞均不同程度受损，细胞的微绒毛减少乃至消失；微管网络消失；细胞变圆；内质网弯曲、折叠；线粒体受损，表现为线粒体肿胀或皱缩，数量减少；胞质内出现大量自噬泡；细胞核界限不完整，核固缩或碎裂；细胞质溶解，呈现典型的凋亡或坏死特征。50μmol／L皂苷作用24h，则大多细胞坏死。 5．蛋白免疫印迹结果证实10μmol／L皂苷、苷甲作用CNE-2Z细胞24h，细胞内聚合的微管蛋白减少，解聚的微管蛋白相应增加。25μmol／L皂苷、苷甲分别作用细胞1h，6h，12h和24h，细胞内解聚的微管蛋白比例呈时间依赖上升。 6．通过分子生物学方法进一步证实皂苷、苷甲诱导CNE-2Z细胞凋亡。试验条件下皂苷及苷甲均使细胞Bcl-2蛋白表达减少，Raf-1蛋白磷酸化活化。随着药物作用浓度升高，时间延长，Bax及磷酸化Raf-1蛋白表达增多。Raf-1蛋白因为磷酸化而活化，启动细胞凋亡；而Bcl-2和Bax分别抑制和促进细胞凋亡。
论文目录:
摘要
ABSTRACT
英文缩略词
第一章 绪论
1.1 鼻咽癌研究概况
1.2 微管蛋白、微管及作用于微管的抗癌药物研究进展
1.2.1 微管和微管蛋白
1.2.2 作用于微管的抗癌药物研究进展
1.3 土贝母及其皂苷研究概况
1.3.1 土贝母简介
1.3.2 土贝母皂苷分离提取工艺及化学结构
1.3.3 土贝母药用研究概况
1.4 本课题研究目的、意义及主要内容
1.4.1 本课题研究目的、意义
1.4.2 本课题研究的主要内容
参考文献
第二章 皂苷的分离提取
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 原料
2.2.2 仪器与试剂
2.2.3 方法
2.3 结果
参考文献
第三章 苷甲对猪脑微管蛋白聚合／解聚影响
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 仪器
3.2.2 试剂及材料
3.2.3 溶液的配制
3.2.4 原料与受试化合物
3.2.5 猪脑微管蛋白的分离提取
3.2.6 微管蛋白定量及纯度鉴定
3.2.7 比浊法测定苷甲对微管蛋白聚合／解聚的影响
3.2.8 离心沉降分析苷甲对微管蛋白聚合／解聚的影响
3.3 结果
3.3.1 猪脑微管蛋白纯度鉴定
3.3.2 苷甲对猪脑微管蛋白聚合／解聚的影响
3.4 讨论
3.5 本章小结
参考文献
第四章 皂苷、苷甲对CNE-2Z细胞作用的形态学观察
4.1 前言
4.2 材料与方法
4.2.1 仪器
4.2.2 试剂
4.2.3 溶液的配制
4.2.4 受试化合物
4.2.5 细胞株
4.2.6 细胞培养
4.2.7 细胞免疫荧光实验
4.2.8 透射电镜观察
4.3 结果
4.3.1 免疫荧光实验结果
4.3.2 电镜观察皂苷、苷甲对细胞超微结构的影响
4.4 讨论
4.5 本章小结
参考文献
第五章 皂苷、苷甲对CNE-2Z细胞tubulin、Raf-l、Bcl-2和Bax表达的影响
5.1 前言
5.2 材料与方法
5.2.1 仪器
5.2.2 试剂
5.2.3 溶液的配制
5.2.4 受试化合物
5.2.5 细胞株及细胞培养
5.2.6 细胞蛋白样品的提取
5.2.7 蛋白免疫印迹检测
5.3 结果
5.3.1 皂苷、苷甲对细胞微管蛋白表达水平的影响
5.3.2 皂苷、苷甲对细胞Raf-1,Bcl-2和Bax表达的影响
5.4 讨论
5.5 本章小结
参考文献
第六章 皂苷、苷甲对CNE-2Z细胞周期的影响
6.1 前言
6.2 材料与方法
6.2.1 仪器
6.2.2 试剂
6.2.3 溶液的配制
6.2.4 受试化合物
6.2.5 细胞株及细胞培养
6.2.6 流式细胞术测定
6.3 结果
6.4 讨论
6.5 本章小结
参考文献
结论与展望
在学期间发表与学位论文内容有关的学术论文
致谢
发布时间: 2006-09-19
参考文献
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- [2].土贝母化学成分及抗肿瘤活性研究[D]. 马挺军.中国农业大学2005
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