论文摘要
目的研究mda-7基因对宫颈Hela细胞生长及凋亡作用。方法采用DNA重组技术，构建mda-7真核表达载体pCDNA3.1（-）-mda-7，用电击法将重组质粒及空载体转染宫颈癌Hela细胞，用G418筛选mda-7基因稳定转染克隆。经逆转录酶链反应（RT-PCR）鉴定mda-7mRNA表达后，用MTT法检测Hela细胞的体外增殖能力、hoechst33258荧光染色和流式细胞术检测宫颈癌Hela细胞的凋亡。结果1．经G418筛选，一周后阴性对照组全部死亡，空载体组和mda-7组形成少量细胞克隆，两周时空载体组和mda-7组形成大量细胞克隆。2．半定量RT-PCR法三组Hela细胞中都可见mda-7mRNA的表达，阴性对照组、空载体组及mda-7组Hela细胞中mda-7 mRNA相对表达水平分别是（0.56±0.003、0.55±0.007、0.92±0.005）。三组Hela细胞中mda-7 mRNA相对表达水平比较，差异具有统计学意义（F=5280.849，P＜0.001）。空载体组和阴性对照组细胞中mda-7mRNA相对表达水平比较，无显著性差异（P＞0.05），两者与mda-7组细胞之间mda-7mRNA相对表达水平比较，有显著性差异（P＜0.05）。3．MTT比色法Mda-7组和空载体组Hela细胞的吸光度值相比，具有显著性差异（P=0.000），Mda-7组和阴性对照组的Hela细胞相比，具有显著性差异（P=0.000），阴性对照组和空载体组的Hela细胞相比，差异无明显统计学意义（P=0.149）。与空载体组和阴性对照组相比，mda-7组的Hela细胞的体外增殖最慢，而空载体组和阴性对照组的生长曲线几乎平行。4．Hoechs染色法空载体组和阴性对照组细胞核形态正常，而实验组（Mda-7组）中Hela细胞皱缩、体积变小、核固缩、边聚形成半月小体，可见凋亡细胞和凋亡小体。5．流式细胞仪法阴性对照组、空载体组和实验组（mda-7组）的Hela细胞的早期凋亡率分别是（6.9％、8.13％、20.12％）。三组HeLa细胞早期凋亡率比较，差异具有统计学意义（F=350.499，P＜0.05）。Mda-7组的早期凋亡率分别与阴性对照组、空载体组相比较，差异具有明显的统计学意义（P＜0.05）。阴性对照组和空载体组的凋亡率比较，差异无明显的统计学意义（P=0.053）。结论1．稳定转染mda-7基因的宫颈癌Hela细胞体外生长受限。2．Mda-7基因对宫颈癌Hela细胞有促调亡作用。