线粒体蛋白TBRG4在乳腺癌中的功能研究

论文摘要

TBRG4被认为是一细胞周期相关基因,定位于线粒体中并受到IL-2与JAK3的负调控。然而其在癌症发生发展中扮演的角色尚未可知。本文使用21T系列乳腺癌细胞系,通过二维电泳加质谱鉴定的定量蛋白质组学方法分析16N,NT,MT2三个遗传背景相同且处于乳腺癌发展不同阶段的细胞系来寻找在肿瘤中差异表达的蛋白,并成功鉴定出了TBRG4蛋白。其作为一个可能的癌基因在正常乳腺细胞系16N中低表达,而在原位及转移型乳腺癌细胞系NT与MT2中表达升高。通过qPCR与WB,我们在一系列乳腺癌细胞系中验证了TBRG4的mRNA及蛋白表达水平。加上使用免疫组化方法对乳腺癌组织芯片进行的检测结果证实TBRG4在乳腺癌中的表达随恶性程度的增加而提高,其确为—癌基因无误。利用pLKO.1慢病毒载体介导的shRNA,我们成功构建了TBRG4稳定抑制的乳腺癌细胞株。应用这一模型,我们评估了TBRG4对于乳腺癌细胞生长及转移的影响。生长实验表明TBRG4的抑制显著降低了肿瘤细胞的生长速度与生存能力,且其表达水平与生长速度呈正相关,这一现象可能与TBRG4下调导致的细胞凋亡水平上升有关。Transwell被用来衡量TBRG4稳定抑制细胞的迁移及侵袭能力,我们认为TBRG4对于乳腺癌细胞的迁移能力有较明显影响,而对侵袭能力影响甚微。本实验利用定量蛋白组学技术自乳腺癌中鉴定出了一全新的癌基因TBRG4,其表达与乳腺癌恶性程度呈正相关。抑制其表达可显著降低肿瘤细胞生长和迁移的速度,其对生长的阻滞作用可能通过促进细胞凋亡来执行。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 前言
• 第一章 TBRG4 在21T系列乳腺癌细胞系中的蛋白组学鉴定
• 1. 材料试剂与仪器
• 2. 实验方法
• 3. 结果与讨论
• 第二章 乳腺癌中TBRG4表达水平的验证
• 1. TBRG4在不同乳腺癌细胞系中的表达
• 2. TBRG4在乳腺癌病人组织样本中的表达
• 3. 总结与讨论
• 第三章 通过慢病毒介导构建TBRG4稳定抑制细胞株
• 1. 构建pLKO.1-TBRG4 shRNA慢病毒载体
• 2. TBRG4 shRNA慢病毒的包装与TBRG4稳定抑制细胞株的筛选
• 3. 总结与讨沦
• 第四章 TBRG4在乳腺癌中的功能鉴定
• 1. TBRG4对乳腺癌细胞生长的影响
• 2. TBRG4对乳腺癌细胞转移的影响
• 3. 总结与讨论
• 总结与展望
• 参考文献
• 致谢